Normalne leukocyty

Pięć głównych kategorii leukocytów u ssaków to neutrofile, eozynofile, bazofile, limfocyty i monocyty. Pierwsze trzy zbiorczo nazywane są granulocytami, ponieważ zawierają one granulki w swojej cytoplazmie, a dwa ostatnie zbiorczo nazywane są komórkami jednojądrowymi w odniesieniu do ich okrągłych jąder. Te zbiorcze określenia są nieco mylące, ponieważ niektóre granulocyty mają ledwie dostrzegalne ziarnistości, a większość monocytów nie ma okrągłych jąder. Granulocyty większości ssaków są klasyfikowane jako neutrofil, eozynofil i bazofil w oparciu o reakcję ich specyficznych granulek z barwnikami w polichromatycznych barwnikach krwi, zwanych barwnikami Romanowsky’ego.

Gatunkiem prototypowym dla klasyfikacji granulocytów jest człowiek, u którego granulki neutrofilów są małe i różowe ze słabym powinowactwem do kompleksów lazurowych, granulki bazofilów są głęboko fioletowe z powodu silnego powinowactwa do kompleksów lazurowych, a eozynofile są intensywnie pomarańczowe z powodu silnego wiązania eozyny. Klasyfikacja granulocytów u gatunków zwierząt jest oparta częściowo na homologii wyglądu do granulocytów ludzkich, a częściowo na wykazaniu homologii zawartości enzymów i funkcji.

Istnieje wiele różnic, niektóre subtelne, a niektóre oczywiste, wśród gatunków i w obrębie gatunków.

Dojrzałe neutrofile

Synonimy: Komórka wielojądrowa (PMN), neutrofile segmentowane

Nutrofil segmentowany, lub heterofil u ptaków, gadów i niektórych ssaków, jest dominującym granulocytem. U wielu gatunków jest to leukocyt dominujący w stanie zdrowia. W stanie zdrowia, zazwyczaj tylko dojrzałe neutrofile są uwalniane ze szpiku i krążą we krwi. Ponieważ dojrzałe neutrofile w prototypowej ludzkiej krwi mają jądra, które są podzielone na płaty skondensowanej chromatyny połączonej włóknami, dojrzałe neutrofile nazywane są neutrofilami segmentowymi („segs” lub „neuts”). Dojrzałe neutrofile wielu gatunków zwierząt nie mają wyraźnego układu płatów i włókienek (mają zwężone jądra lub nieregularne/pochylone zarysy jąder), mimo to, są one również nazywane neutrofilami segmentowymi. Neutrofile są częścią wrodzonego układu odpornościowego i stanowią pierwszą linię obrony przed patogenami bakteryjnymi (i są do tego niezbędne). Neutrofile mają krótki okres półtrwania – utrzymują się tylko przez 10-15 godzin po uwolnieniu ich do krwi obwodowej (Carakostas i wsp. 1981). Analizując krew pobieramy jedynie próbkę krążących neutrofili, a nie pulę marginalną lub rezerwową w szpiku. U większości gatunków, innych niż koty, stosunek puli krążącej do puli marginalnej wynosi 1:1 (Carakostas i wsp. 1981) (u koni szacuje się go na 3:1). Uwolnienie neutrofili z puli marginalnej występuje w odpowiedzi na kortykosteroidy (endogenne lub egzogenne), które zmniejszają cząsteczki adhezyjne odpowiedzialne za marginalizację (lub patrolowanie śródbłonka poprzez selektynę) i może potencjalnie podwoić liczbę dojrzałych neutrofili (tzw. „leukogram stresu”).

Neutrofile niedojrzałe

W niektórych zwierzętach niedojrzałe neutrofile mogą być widoczne we krwi obwodowej, a ich obecność nazywana jest przesunięciem w lewo. Obecność zwiększonej liczby niedojrzałych neutrofilów (tj. powyżej ustalonego przedziału referencyjnego dla danego gatunku) wskazuje zwykle na odpowiedź na cytokiny zapalne i leukogram zapalny. Najczęstszym typem niedojrzałego neutrofilu widzianego we krwi jest neutrofil taśmowy, który jest o jeden stopień mniej dojrzały niż neutrofil segmentowy. Neutrofile pasmowe odróżniają się od dojrzałych neutrofili kształtem jądra, które nie ma wyraźnej segmentacji (segment jest definiowany jako >50% zwężenie na szerokości jądra) i nieregularnego zarysu dojrzałego neutrofila. W niektórych sytuacjach uwalniane są stadia wcześniejsze niż pasma (np. metamyelocyty; patrz niżej). Lewemu przesunięciu zazwyczaj (ale nie zawsze) towarzyszy zmiana toksyczna (zmiana toksyczna może nie być widoczna, jeżeli występuje łagodne przesunięcie w lewo lub jeżeli występuje tylko uwolnienie niedojrzałych komórek ze szpiku bez przyspieszonego dojrzewania). Jednakże, niedojrzałe neutrofile mogą być również uwalniane przedwcześnie w zaburzeniach szpiku kostnego, takich jak białaczka lub ciężkie uszkodzenie szpiku kostnego (niedojrzałe neutrofile zazwyczaj nie są również toksyczne w tym ustawieniu).

Dojrzałe neutrofile są klasyfikowane w oparciu o ich stadium dojrzewania. Najwcześniejszym możliwym do zidentyfikowania specyficznym prekursorem neutrofilów jest mielocyt, który różnicuje się w metamyelocyt, następnie w neutrofil pasmowy, a w końcu w dojrzały neutrofil segmentowy. Tylko mielocyt jest zdolny do podziału – wszystkie bardziej dojrzałe stadia (metamyelocyt, neutrofil pasmowy, neutrofil segmentowy) są niezdolne do podziału (postmitotyczne). Podstawowym kryterium odróżniania niedojrzałych neutrofili od siebie jest kształt ich jądra, które w miarę dojrzewania komórki zaczyna się wciskać lub zwężać. Mielocyt ma okrągłe jądro, metamyelocyt ma jądro wgłębione lub w kształcie nerki, a zespół ma jądro w kształcie podkowy lub równoległoboczne (dla skompilowanego obrazu niedojrzałych neutrofilów, proszę odnieść się do stron przesunięcia w lewo lub zmiany toksycznej). Ważne jest, aby odróżnić niedojrzałe neutrofile od monocytów, szczególnie u psów, gdzie komórki te mogą przypominać siebie nawzajem (patrz monocyt poniżej). Osiąga się to przez spojrzenie na wszystkie cechy komórki (chromatyna jądrowa, kształt jądra, lokalizacja jądra w komórce, kolor cytoplazmy, granice cytoplazmy, obecność lub brak wakuoli i granulek) w zgodzie (patrz obraz po prawej).

Przy wykonywaniu różnicowego liczenia komórek, klasyfikujemy neutrofile do kategorii „segmentowane”, jeśli jądro ma regiony, które są wyraźnie zwężone (więcej niż 50% szerokości jądra) lub ma boczne wypukłości skutkujące nieregularnymi brzegami jądra. Komórka, której brzegi jądra są gładkie i równoległe (lub prawie równoległe) jest neutrofilem „pasmowym” i jako taka powinna być liczona. Bardziej niedojrzałe stadia są klasyfikowane na podstawie ich kształtu jądra, jak opisano powyżej. Należy pamiętać, że komórki pomiędzy tymi dobrze zdefiniowanymi stadiami zawsze będą widoczne we krwi. W tych okolicznościach, dana komórka będzie umieszczona w bardziej dojrzałej kategorii, tj. komórka z cechami jądrowymi w połowie drogi między pasmem a neutrofilem segmentowanym będzie nazywana neutrofilem segmentowanym. Bardziej niedojrzałe neutrofile mogą być liczone oddzielnie jako ich specyficzne kategorie lub zgrupowane razem jako neutrofile „pasmowe”. Na Uniwersytecie Cornella, wszystkie niedojrzałe neutrofile (neutrofile pasmowe, metamielocyty i mielocyty) są zgrupowane w „pasmo” kategorii naszego różnicowego liczenia komórek. Używając powyższego obrazu jako przykładu, komórki od B do D byłyby liczone jako „pasma” i tylko komórka A byłaby liczona jako „segmentowany” neutrofil. Jednakże, jeśli obserwujemy stadia, które są mniej dojrzałe niż neutrofil pasmowy (metamyelocyt lub mielocyt), podajemy tę informację w wynikach (np. przesunięcie w lewo rozciąga się na mielocyty). Obecność tych bardziej niedojrzałych stadiów zwykle wskazuje na cięższy stan zapalny niż obecność samych neutrofili pasmowych.

Eozynofile

Ziarnistości eozynofilów u większości zwierząt są pomarańczowe, ale zawsze są wyjątki, szczególnie u egzotyków. Granulki w eozynofilach legwanów i niektórych ptaków są w rzeczywistości bladoniebieskie. Ogólnie rzecz biorąc, jądra dojrzałych eozynofilów są krótsze i mniej segmentowane niż jądra neutrofilów, a cytoplazma, jeśli jest widoczna, jest bladoniebieska. Istnieje wyraźne zróżnicowanie gatunkowe dotyczące liczby, wielkości i kształtu granulek eozynofilów.

Największe zróżnicowanie wewnątrzgatunkowe występuje w eozynofilach psów. Wyraźna zmienność w wielkości, liczbie i kształcie granulek występuje w obrębie i pomiędzy osobnikami każdej rasy. Specyficzna i przewidywalna odmiana morfologiczna eozynofilów jest widoczna u chartów, innych psów morskich (np. Whippetów, Deerhoundów) i u niektórych Golden Retrieverów. Eozynofile u tych ras nie mają widocznych ziarnistości i występują jako komórki z lekko segmentowanymi jądrami, szarą cytoplazmą i wakuolami. Są one czasami mylone z toksycznymi neutrofilami lub monocytami i nazywane są „wakuolami” lub „szarymi” eozynofilami (zobacz reprezentatywne obrazy tych eozynofilów w galerii krwi psów w albumie hematologicznym). W analizatorze hematologicznym ADVIA dryfują one do bramki monocytów (zawierają mniej peroksydazy niż neutrofile lub normalne ziarniste eozynofile).

Bazykofile

Prototypowe bazofile krwi ludzkiej są wypełnione małymi, okrągłymi, ciemnofioletowymi ziarnistościami. Podobne bazofile występują u koni, wielbłądów i przeżuwaczy. Komórki te zawierają wiele małych, głęboko fioletowych granulek, które w wielu komórkach przesłaniają jądro. Niektóre bazofile mają niewiele granulek, co prawdopodobnie jest wynikiem degranulacji w próbce. Niska liczba bazofilów jest powszechnie spotykana we krwi zdrowego bydła i koni, ale w mniejszym stopniu u wielbłądów.

Podgruczolaki psie są trudne do rozpoznania, ponieważ wiele z nich nie ma łatwo widocznych ziarnistości. Dzieje się tak dlatego, że granulki są blado lawendowe w przeciwieństwie do purpurowych. Głównymi cechami rozpoznawczymi bazofilów psich są długie i pofałdowane jądro, opisywane jako „wstęgopodobne”, oraz niezwykły szary do lawendowego odcień cytoplazmy. Niektóre bazofile zawierają kilka oczywistych jasnofioletowych granulek (granulki są łatwiejsze do zauważenia w komórkach, które są pęknięte). Bazofile są rzadkie we krwi zdrowych psów. Bazofile kotów są wypełnione małymi, lekko owalnymi ziarnistościami, które są raczej blado lawendowe niż głęboko purpurowe. Jądro wielu z nich wydaje się mieć wakuole, które w rzeczywistości są granulkami leżącymi na wierzchu chromatyny. Bazofile są rzadkie we krwi zdrowych kotów.

Limfocyty

Większość limfocytów, które krążą u zdrowych psów, kotów, wielbłądów i koni to małe (dojrzałe) komórki, które mają okrągłe jądra z gładką, gęstą chromatyną i małą obwódką jasnoniebieskiej cytoplazmy. Chromatyna jest tak gęsta, ponieważ w większości jest to heterochromatyna (komórka nie dokonuje aktywnej transkrypcji DNA). Limfocyty muszą być odróżnione od czerwonych krwinek z jądrami (patrz poniżej). Niektóre limfocyty u wszystkich gatunków mogą mieć zwiększoną ilość bardzo jasnoniebieskiej do bezbarwnej cytoplazmy. Nie są one nazywane reaktywnymi, ale są po prostu uważane za normalne „warianty”. Niektóre limfocyty są nieco większe i mają drobniejszy, luźniejszy wzór chromatyny. Limfocyty znajdujące się we krwi normalnych przeżuwaczy są dość zróżnicowane pod względem wyglądu. Wiele z nich to limfocyty pośrednie z luźno zbitą chromatyną i dość obfitą cytoplazmą. Nie wszystkie limfocyty w rozmazie krwi są okrągłe. Niektóre są zniekształcone do innych kształtów przez siły mechaniczne przyłożone do nich podczas rozmazu, a niektóre są uformowane przez kontakt z czerwonymi komórkami. Limfocyty oceniamy na podstawie wielkości jądra w stosunku do neutrofilów (które są tej samej wielkości u wszystkich gatunków), jak pokazano w poniższej tabeli. Ponadto, normalne limfocyty muszą być odróżniane od czerwonych krwinek z jądrami, limfocytów reaktywnych i komórek nowotworowych (które mogą być mieloidalne lub limfoidalne). Więcej informacji na ten temat podanych jest poniżej.

Wielkość limfocytów

Wielkość limfocytów	Wielkość jądra w stosunku do neutrofila
Małe	Jądro limfocytu może zmieścić się wewnątrz neutrofila
Średni	Jądro limfocytu jest tej samej wielkości co neutrofila
Duży	Jądro neutrofila może zmieścić się wewnątrz jądra.

Inne limfocyty, które mogą być widoczne we krwi to:

• „Reaktywne” limfocyty są związane z odpowiedzią immunologiczną. Mogą się różnić wielkością (małe do dużych), ale mają zbitą (heterochromatynę) chromatynę i zwykle zwiększone ilości głębiej niebieskiej cytoplazmy, która jest dość gładka. Niektóre mogą mieć wyraźne wakuole cytoplazmatyczne. Ważne jest, aby odróżnić reaktywne duże limfocyty od „blastów” związanych z białaczką (patrz poniżej). Do ich rozróżnienia używamy różnych technik, w tym cech cytologicznych, wyników klinicznych i pozostałych wyników hemografii. Limfocyty reaktywne mogą być widoczne u każdego zwierzęcia, ale są dość powszechne we krwi młodych zwierząt, szczególnie tych, które były niedawno szczepione.
• Limfocyty ziarniste: Występują one również w niewielkiej liczbie u zdrowych zwierząt (obejmują od 1-10% wszystkich limfocytów). Limfocyty ziarniste wyróżniają się obecnością małych czerwonych granulek zebranych w jednym obszarze cytoplazmy, zwykle w obrębie wgłębienia jądra. Limfocyty ziarniste są albo cytotoksycznymi limfocytami T, albo naturalnymi komórkami zabójczymi. Zwiększona liczba limfocytów ziarnistych może być widoczna w stanach reaktywnych (np. zakażenie Ehrlichia canis u psów, przewlekła choroba nerek u psów) lub jako część pierwotnej białaczki (białaczka limfocytów ziarnistych).

Limfocyty versus jądrzaste krwinki czerwone

Bardzo późne stadia nRBC, takie jak metarubrycyt, odróżniają się od limfocytów polichromatofilną cytoplazmą i piknotycznymi jądrami. Wcześniejsze etapy, takie jak bazofilny rubrycyt, choć stanowią większy problem, mają głębszą niebieską cytoplazmę i bardziej grubo skondensowany wzór chromatyny w porównaniu z limfocytem.

Ogólny kontekst rozmazu może być również brany pod uwagę; np. nRBCs powinny towarzyszyć wyraźnej polichromazji (reakcja regeneracyjna). Nie jest to prawdą u wielbłądowatych i kotów, gdzie nRBC są często widoczne we krwi w różnych sytuacjach, nie tylko w niedokrwistościach regeneracyjnych.

Reaktywne limfocyty versus blasty

Ważne jest rozróżnienie dużych reaktywnych od nowotworowych komórek krwiotwórczych („blastów”). Te ostatnie nie są obserwowane u normalnych zwierząt, lecz jedynie u zwierząt z nowotworami układu krwiotwórczego (ostra białaczka, chłoniak z fazą białaczkową lub rzadko w zespole mielodysplastycznym). Należy pamiętać, że odróżnienie reaktywnych limfocytów od białaczkowych „blastów” może być bardzo trudne u zwierząt z niską liczbą problematycznych komórek, tzw. komórek „dużych niebieskich”. Obecność komórek nowotworowych wskazuje na białaczkę, podczas gdy limfocyty reaktywne wskazują na stymulację antygenową (bardzo różne znaczenia). Powodem, dla którego nazywamy te komórki „blastami” jest fakt, że nie możemy jednoznacznie określić ich linii na podstawie cech morfologicznych; wymagane są inne narzędzia, takie jak immunofenotypowanie i barwienie cytochemiczne. Więcej informacji na temat sposobu rozróżniania tych dwóch bardzo różnych typów leukocytów we krwi (reaktywnych lub nowotworowych) można znaleźć na stronie poświęconej „dużym niebieskim” komórkom.

Monocyty

Monocyty są leukocytami, które sprawiają najwięcej problemów w identyfikacji, ponieważ mogą być dość zmienne pod względem wielkości i wyglądu. Często są większe niż neutrofile i zwykle są największym leukocytem, ale nie ma spójnych różnic gatunkowych. Jądro może być okrągłe, nerkowate lub pseudo-lobulowate (może naśladować neutrofil). Może nawet czasami mieć kształt pasma, szczególnie u psów, i może być mylone z neutrofilami pasmowymi. Jednakże, chromatyna monocytów jest mniej gęsta niż neutrofilów i jest opisywana jako koronkowa do lekko zbitej. Cytoplazma jest zwykle gładka i niebiesko-szara i może zawierać kilka różnej wielkości wakuoli, a czasami kilka bardzo drobnych różowo-czerwonych granulek. Niektóre, jak monocyt koński, przypominają limfocyty. Tekstura cytoplazmy w monocycie jest lekko ziarnista lub szorstka w porównaniu z cytoplazmą limfocytów, która jest bardzo gładka i szklista.

Powiązane linki

• Interpretacja zmian w liczbie pojedynczych leukocytów i obecność nieprawidłowych leukocytów we krwi, np. komórek tucznych, histiocytów.
• Wzorce leukocytów: Leukocytoza fizjologiczna, leukogram stresowy, leukogram zapalny, leukemia
• Cechy morfologiczne nRBC i interpretacja zwiększonej liczby we krwi.
• Cechy morfologiczne niedojrzałych neutrofili
• Cechy morfologiczne toksycznej zmiany w neutrofilach.
• Skrócony przewodnik po testach: Skrócony przewodnik interpretacji zmian w wynikach badań hematologicznych
• Atlas: Do zestawień obrazów.

.