Le nombre de copies de la O6-Méthylguanine-ADN Méthyltransférase (MGMT) méthylée est déterminé par rapport au nombre de copies de la bêta-actine (ACTB) par une réaction en chaîne par polymérase spécifique de la méthylation en temps réel (MSP). Pour ce faire, le contenu du tissu tumoral est enrichi par microdissection manuelle suivie d’une extraction d’ADN. L’ADN est quantifié à l’aide de Picogreen et modifié par un traitement au bisulfite qui entraîne la conversion des cytosines non méthylées en uracyle tandis que les cytosines méthylées restent inchangées. Ensuite, une Methylation Specific PCR (MSP) en temps réel est réalisée sur l’instrument Quantstudio 5 pour quantifier le nombre de copies de MGMT et ACTB (1). Cette technique consiste à effectuer une PCR avec détection en temps réel à l’aide du système de détection amplifluorée. Les échantillons dont le nombre de copies est inconnu peuvent être quantifiés par comparaison de leurs valeurs Ct avec celles d’une courbe standard de plasmide.
Implication clinique
MGMT est une enzyme de réparation de l’ADN qui est fréquemment désactivée par hyperméthylation dans le cancer humain. Lorsque les cellules manquent d’activité MGMT, les dommages à l’ADN ne sont pas réparés correctement, ce qui rend un individu plus enclin à développer un cancer. Il est intéressant de noter que ce manque d’activité de la MGMT rend également une cellule tumorale plus sensible à la radiothérapie et à certains médicaments alkylants tels que le témozolomide (2). Dans l’étude internationale de validation du pronostic de phase III (RTOG 0525), le test MGMT a permis d’identifier les patients atteints de glioblastome nouvellement diagnostiqué qui sont plus susceptibles de vivre plus longtemps et d’avoir une période sans progression plus longue après un traitement au témozolomide (3-5). Récemment, une nouvelle publication a été publiée dans laquelle les patients méthylés et ceux de la « zone grise » ont obtenu des résultats significativement meilleurs pour la survie globale que les patients réellement non méthylés (6).
Exigences en matière de spécimens
Les spécimens acceptables pour le test sont des spécimens de tissu de gliome fixés au formol et inclus en paraffine avec un temps de fixation de 6-48 heures.
Volume
Un bloc de paraffine représentatif est préférable. Alternativement, 5 sections de tissu non colorées sont acceptées (1 lame de 5 µm d’épaisseur pour la coloration H&E et un minimum de 4 lames de 5-10 µm d’épaisseur pour le test MGMT).
Instructions de stockage et d’expédition
Maintenir et expédier les spécimens à température ambiante.
Limitations
Pour certains échantillons, un résultat non valide sera obtenu en raison d’un nombre insuffisant de copies ACTB combiné à un nombre de copies MGMT inférieur à la limite de détection. La plupart du temps, cela s’explique par une quantité et/ou une qualité d’ADN insuffisante. Pour les échantillons non valides dont le nombre de copies de MGMT et/ou d’ACTB se situe autour de la LOD/LOQ et du seuil de coupure, il est recommandé d’effectuer un nouveau test à partir de l’ADN traité au bisulfite. Les fixatifs autres que le formol ou un temps de fixation prolongé peuvent donner lieu à des résultats inadéquats.
Exigences particulières
Aucune
Délai d’exécution
Cinq à sept jours ouvrables pour les lames et les blocs de paraffine respectivement.
- Vlassenbroeck I et al. Validation de la PCR spécifique de méthylation en temps réel pour déterminer la méthylation du promoteur du gène de la O6-Méthylguanine-DNA Methyltransferase dans le gliome. J Mol Diagn. 2008 Jul;10(4):332-7
- Hegi ME et al. MGMT gene silencing and benefit from temozolomide in glioblastoma. N Engl J Med 2005 Mar 10;352(10):997-1003.
- Gilbert MR et al. Dose-dense temozolomide for newly diagnosed glioblastoma : a randomized phase III clinical trial.(7). J Clin Oncol. 2013 Nov 10;31(32):4085-91.
- Malmström A et al. Temozolomide versus radiothérapie standard de 6 semaines versus radiothérapie hypofractionnée chez les patients de plus de 60 ans atteints de glioblastome : l’essai nordique randomisé de phase 3. Lancet Oncol 2012 Sep ; 13(9) : 916-926.
- Wick W et al. Chimiothérapie par temozolomide seul contre radiothérapie seule pour l’astrocytome malin chez les personnes âgées : l’essai NOA-08 randomisé, phase 3. Lancet Oncol 2012 Jul ; 13(7) : 707-715.
- Hegi ME et al. Coupure de méthylation du promoteur MGMT avec marge de sécurité pour sélectionner les patients atteints de glioblastome dans des essais omettant le témozolomide. Une analyse groupée de quatre essais cliniques. Clin Cancer Res 2019 Mar 15 ; 25(6) : 1809-1816.
Mise à jour le 23 mai 2019
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