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La coloration de Gram, la procédure de coloration la plus largement utilisée en bactériologie, est une procédure de coloration complexe et différentielle. Grâce à une série d’étapes de coloration et de décoloration, les organismes du domaine Bactéries sont différenciés en fonction de la composition de leur paroi cellulaire. Les bactéries Gram positif ont des parois cellulaires qui contiennent des couches épaisses de peptidoglycane (90% de la paroi cellulaire). Elles se colorent en violet. Les bactéries Gram-négatives ont des parois avec de fines couches de peptidoglycane (10% de la paroi), et une forte teneur en lipides. Elles se colorent en rose. Cette méthode de coloration n’est pas utilisée pour les archées ou les eucaryotes, car ils ne possèdent pas de peptidoglycane. La réalisation de la coloration de Gram sur tout échantillon nécessite quatre étapes de base qui comprennent l’application d’une coloration primaire (cristal violet) sur un frottis fixé à la chaleur, suivie de l’ajout d’un mordant (iode de Gram), d’une décoloration rapide avec de l’alcool, de l’acétone ou un mélange d’alcool et d’acétone et enfin, d’une contre-coloration avec de la safranine.
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