Forklaringer om screenings- og bekræftelsesgrænseværdier.
af Michelle Lach, MSIMC
Foreløbig testning (dvs. indledende testning, screening), bekræftelse og grænseværdier er nogle af de komplekse aspekter af lægemiddelprøver, som ofte kan misforstås af personer uden for laboratorieverdenen. For at kaste mere lys over emnet ønskede vi at nedbryde trinene i vores testning og forklare, hvordan de svarer til de resultater, vi sender ud til vores kunder.
Til at begynde med er det vigtigt at forstå forskellen mellem stofklasser og stoffer, herunder stofskifteprodukter. Narkotikaklasser er de overordnede grupper, under hvilke individuelle stoffer, der ligner hinanden i natur, kategoriseres, og de er således grundlaget for, hvordan vores testpaneler for stoffer klassificeres (dvs. amfetamin, cannabinoider, opiater osv.) (Figur 1).
Inden for en narkotikaklasse er der stoffer og deres metabolitter (dannet, når et stof metaboliseres af kroppen). Vi tester for specifikke stoffer og/eller stofskifteprodukter, som er mest nyttige til at antyde indtagelse eller eksponering af misbrugsstoffer. Der er f.eks. mange forskellige stoffer, der hører under narkotikaklassen amfetamin, men vi tester kun for amfetamin, MDA, MDEA, MDMA og methamfetamin (figur 2). Det samme gælder for cannabinoider, hvor der er langt over 100 individuelle forbindelser, der kan kategoriseres under denne stofklasse. Den vigtigste farmakologisk aktive ingrediens i cannabisplanten er tetrahydrocannabinol (THC), så vores testning ser kun efter THC eller stofmetabolitten Carboxy THC.
Initial Testing and Results
Screening er den proces, hvor alle prøver sendes gennem meget følsomme instrumenter, der er hurtige og effektive til at afgøre, om en prøve kan indeholde stoffer af interesse. Screeningsprocessen tester kumulativt for mange forbindelser, der falder inden for de givne lægemiddelklasser. De stofklasser, der screenes, bestemmes af de stofpaneler, som kunden har valgt til testning.
Hvis en prøve gennemløber screeningprocessen, og der ikke påvises noget, bekræfter vores negative certificerende videnskabsmænd de negative resultater, og den negative rapport sendes ud. Det er derfor, at de negative resultater generelt har en hurtig ekspeditionstid.
Hvis en prøve gennemgår screeningsprocessen, og der påvises noget, betyder det, at vi skal se nærmere på, hvad det er, men det betyder ikke, at den er testet positiv for et specifikt stof eller en specifik stofskifteaktivitet endnu. Det betyder blot, at prøven ikke blev testet negativt, da den blev testet for mange forskellige forbindelser. På dette tidspunkt skal prøven gå ind til bekræftelsestestning.
Bekræftelsestestning og resultater
Som et akkrediteret retsmedicinsk toksikologisk laboratorium er vi forpligtet til at bekræfte alle resultater, som vi rapporterer ud som positive. For at udføre bekræftelsestestning analyseres en anden del af den oprindelige prøve med et mere avanceret og specifikt instrument, men denne gang har vi på grund af screeningsresultaterne en idé om, hvad vi skal kigge efter, og hvilke stoffer vi skal overveje. Bekræftelsestestning tager længere tid at gennemføre end screening, fordi instrumentet leder efter individuelle stoffer og stofskifteprodukter. Bekræftelse af positive resultater kan tage op til 24-48 ekstra timer, efter at screeningsresultaterne er blevet afsluttet.
Cutoff-niveauer
Cutoff-niveauer er de detektionstærskler for forbindelser, der er indstillet på testinstrumentet.
For at bruge cannabinoid-eksemplet er vores screenings-cutoff-niveau for cannabinoid-stofklassen i en hårprøve 1 pg/mg. Hvis nogen af de hundredvis af cannabinoider kumulativt registreres over dette grænseværdieniveau, vil prøven blive testet til bekræftelse. Som tidligere nævnt søger vores bekræftelsesinstrumenter kun efter et af to specifikke stoffer/stofmetabolitter, der er af interesse, når det drejer sig om testning for indtagelse eller eksponering for cannabis, nemlig Carboxy THC (indtagelse) og/eller THC (eksponering). Alle andre cannabinoider, der kan have bidraget til at nå screeningsgrænseværdierne, testes ikke for under bekræftelsen, da de i øjeblikket ikke anses for at være relevante for påvisning af indtagelse eller eksponering for cannabis.
Screening- og bekræftelsesgrænseværdier skaber ofte forvirring, når det gælder testresultater. Vi bliver ofte spurgt, hvordan en almindelig hårtest kan bekræfte positiv for Carboxy THC ved, lad os sige 0,15 pg/mg, når screeningsgrænseværdien ligger et godt stykke over denne grænse på 1 pg/mg. Svaret er, at screenings- og bekræftelsestest er helt forskellige tests, der anvender forskellige instrumenter og ser på forskellige ting. Screeningsgrænseværdierne blev nået med flere testede cannabinoider, der blev registreret over screeningtestens grænseværdi (1 pg/mg). Da prøven blev underkastet en separat bekræftelsestest (en helt anden test fra start til slut), blev der kun målt carboxy THC med andre grænseværdier (0,05 pg/mg). Det betyder, at ud af alle de cannabinoider, der blev registreret i prøven, var der kun 0,15 pg/mg Carboxy THC i prøven.
Når vi bruger cannabiseksemplet specifikt for hårtest, er det vigtigt at bemærke, at vi har to forskellige test til påvisning af THC i en hårprøve. Selv om screeningsprocessen for begge test er den samme, er testforberedelses- og bekræftelsesprocesserne forskellige. Figur 3-6 illustrerer forskellen i THC-detektion mellem de to test.
Drugstest i hår: Denne test anvendes hyppigst, når man tester voksne for cannabisbrug (indtagelse). Bekræftelsesinstrumentet til denne test søger efter Carboxy THC, stofmetabolitten af THC. Tilstedeværelsen af Carboxy THC indikerer indtagelse, fordi det kun findes, hvis kroppen har metaboliseret THC.
Håreksponeringstest (ChildGuard®): Hår har en porøs overflade, så stoffer fra omgivelserne har tendens til at klæbe til det, hvilket gør eksponeringstest muligt. Denne test anvendes oftest til mindreårige eller personer under juridisk værgemål, når deres omgivelser menes at være usikre på grund af stofeksponering. Der er tale om en test for indtagelse og eksponering, og derfor søger bekræftelsestesten efter både Carboxy THC og THC. Dette er en særlig test, fordi eksponeringstesten i modsætning til den almindelige hårtest for narkotika vil rapportere et bekræftet positivt resultat, hvis THC eller Carboxy THC eller begge dele er til stede i prøven. Dette er den eneste hårdrugstest, der kan teste for passiv stofeksponering uden behov for indtagelse. Det er en fordel for donorer, der udsættes for skadelige miljøer, men som måske eller måske ikke selv indtager stofferne, selv om utilsigtet indtagelse kan forekomme. Donorer, der har tendens til ofte at stikke hænderne i munden (yngre, udviklingshæmmede osv.), kan ved et uheld indtage rester af stoffer fra deres omgivelser.
Figur 3 illustrerer en screeningstest på en hårprøve for indtagelse af cannabinoider. Man kan se, at der er adskillige cannabinoider, der påvises i prøven, som kan resultere i en test, der kræver en nærmere undersøgelse med bekræftelsestest. Det kumulative niveau af de påviste cannabinoidforbindelser (THC, carboxy og andre) vil alle bidrage til at nå grænseværdien for screening (1 pg/mg). Hvis den påviselige mængde forbindelser i en prøve falder under screeningsgrænseværdien, vil prøven blive gennemgået og verificeret af en negativ certificerende forsker og rapporteret som et negativt resultat.
Figur 4 illustrerer den bekræftelsestest for indtagelse, der vil følge efter screeningtesten fra prøveeksemplet i figur 3, hvis den påviselige mængde af forbindelser i cannabinoidstofklassen overstiger screeningsgrænseværdien på 1 pg/mg. Da der er tale om en bekræftelsestest for indtagelse, vil den kun påvise de specifikke niveauer af Carboxy THC. Hvis niveauerne overstiger grænseværdien for bekræftelse af Carboxy THC (0,05 pg/mg), vil resultaterne blive gennemgået og verificeret af en positiv certificerende videnskabsmand og derefter rapporteret som et bekræftet positivt resultat. Hvis niveauerne af Carboxy THC ikke overstiger grænseværdierne for bekræftelse, vil resultaterne blive gennemgået og verificeret af en negativ certificerende forsker og rapporteret som et negativt resultat.
Figur 5 svarer til figur 3, men illustrerer screeningen af en prøve, der tyder på miljøeksponering og ikke på indtagelse. Selv om der mangler Carboxy THC, vil THC og andre cannabinoider bidrage til de kumulative niveauer i prøven.
Figur 6 illustrerer den bekræftelsestest, der vil følge efter screeningtesten for THC-eksponering for prøveeksemplet i figur 5. Igen vil man bemærke manglen på Carboxy THC i prøven, hvilket skyldes, at THC ikke er blevet metaboliseret af donor, hvilket generelt tyder på miljømæssig eksponering. Bekræftelsestesten for miljøeksponering vil også påvise Carboxy THC, hvis det er til stede.
Screening- og bekræftelsesteknikker samt cutoff-niveauerne kan variere fra den ene prøve til den anden. Vi håber, at en bedre forståelse af betydningen af disse elementer og deres funktioner i forbindelse med narkotikatestning kan bidrage til at udvide den generelle viden om, hvordan forskellige prøvetests og lægemiddelpaneler kan anvendes for at opnå de bedste resultater.
Michelle Lach, chefredaktør for Substance/NeoTox og marketingchef hos USDTL, har arbejdet i branchen for narkotikatestning i over 5 år for at bidrage til at give offentligheden en bedre forståelse af avancerede narkotikatesttjenester, så de rigtige tests og de bedste resultater kan udnyttes.