Diagnosen af Cushings syndrom er baseret på en gennemgang af din sygehistorie, fysisk undersøgelse og laboratorieprøver, som er med til at bestemme tilstedeværelsen af et for højt kortisolniveau. Ofte er røntgenundersøgelser af binyrerne eller hypofyserne nyttige til at lokalisere tumorer. Desuden vil en sammenligning af gamle og nyere fotografier ofte fremhæve ændringerne i ansigtet og kroppens udseende hos patienter, der udvikler Cushings syndrom. Det første skridt i diagnosticeringen af Cushings syndrom er at bekræfte tilstedeværelsen af overdreven kortisolsekretion. Denne diagnose stilles lettest ved følgende test:
- Lavdosis dexamethason-suppressionstest, der indebærer, at man tager en lille dosis af et kortisollignende lægemiddel dexamethason (1 mg) kl. 23.00 og får taget blodprøve for kortisol den følgende morgen. Normale personer har typisk meget lave kortisolniveauer i disse prøver, hvilket indikerer, at ACTH-sekretionen er undertrykt, mens kortisol let påvises og ofte er forhøjet hos patienter med Cushings syndrom.
- 24-timers urinopsamling til måling af kortisolniveauer.
Når diagnosen Cushings syndrom er stillet, skal kilden til det overskydende kortisol bestemmes. Kilden kan være fra en binyretumor, en ACTH-producerende tumor eller et hypofysært ACTH-producerende adenom. Petrosal sinusprøveudtagning er en test, der anvendes til at skelne kilden til ACTH-sekretionen, og bør aldrig udføres, før diagnosen Cushings syndrom er blevet fastslået.
Hvis laboratorieprøver tyder på et hypofyseadenom som årsag til Cushings syndrom, udføres en hypofyse-magnetisk resonansafbildning (MRI) for at bekræfte diagnosen.