Leucociti normali

Le cinque principali categorie di leucociti nei mammiferi sono neutrofili, eosinofili, basofili, linfociti e monociti. I primi tre collettivamente sono chiamati granulociti, perché contengono granuli nel loro citoplasma, e gli ultimi due collettivamente sono chiamati cellule mononucleari in riferimento ai loro nuclei rotondi. Questi termini collettivi sono un po’ fuorvianti poiché alcuni granulociti hanno granuli appena percettibili e la maggior parte dei monociti non hanno nuclei rotondi. I granulociti della maggior parte dei mammiferi sono classificati come neutrofili, eosinofili e basofili in base alla reazione dei loro granuli specifici con i coloranti nelle macchie di sangue policrome, chiamate macchie Romanowsky.

La specie prototipo per la classificazione dei granulociti è l’uomo, in cui i granuli dei neutrofili sono piccoli e rosa con debole affinità per i complessi azzurri, i granuli dei basofili sono viola intenso a causa della forte affinità per i complessi azzurri, e gli eosinofili sono intensamente arancioni per il forte legame dell’eosina. La classificazione dei granulociti nelle specie animali si basa in parte sull’omologia dell’aspetto dei granulociti umani e in parte sulla dimostrazione dell’omologia del contenuto enzimatico e della funzione.

Ci sono molte differenze, alcune sottili e altre evidenti, tra le specie e all’interno delle specie.

Nutrofili maturi

Sinonimi: Cellule polimorfonucleate (PMN), neutrofili segmentati

Il neutrofilo segmentato, o eterofilo negli uccelli, nei rettili e in alcuni mammiferi, è il granulocita predominante. In molte specie è il leucocita predominante in salute. In salute, di solito solo i neutrofili maturi vengono rilasciati dal midollo per circolare nel sangue. Poiché i neutrofili maturi nel sangue umano prototipo hanno nuclei segmentati in lobi di cromatina condensata collegati da filamenti, i neutrofili maturi sono chiamati neutrofili segmentati (“segs” o “neuts”). I neutrofili maturi di molte specie animali non hanno una disposizione distinta dei lobi e dei filamenti (hanno nuclei ristretti o contorni nucleari irregolari), tuttavia, anche loro sono chiamati neutrofili segmentati. I neutrofili fanno parte del sistema immunitario innato e sono la prima linea di (e sono essenziali per) difesa contro gli agenti patogeni batterici. I neutrofili hanno una breve emivita – persistono solo per 10-15 ore una volta che sono stati rilasciati nel sangue periferico (Carakostas et al 1981). Quando analizziamo il sangue, stiamo solo campionando il pool di neutrofili circolanti e non il pool marginale o di riserva nel midollo. Nella maggior parte delle specie, a parte i gatti, il rapporto tra pool circolante e marginante è di 1:1 (Carakostas et al 1981) (è stimato a 3:1 nei cavalli). Il rilascio di neutrofili dal pool di marginazione avviene in risposta ai corticosteroidi (endogeni o esogeni), che downregolano le molecole di adesione responsabili della marginazione (o del pattugliamento dell’endotelio tramite rotolamento mediato dalla selectina) e ha il potenziale di raddoppiare la conta dei neutrofili maturi (il cosiddetto “leucogramma da stress”).

Neutrofili immaturi

In alcuni animali, neutrofili immaturi possono essere visti nel sangue periferico e la loro presenza è chiamata left shift. La presenza di un numero aumentato di neutrofili immaturi (cioè al di sopra dell’intervallo di riferimento stabilito per quella specie) di solito indica una risposta alle citochine infiammatorie e un leucogramma infiammatorio. Il tipo più comune di neutrofilo immaturo visto nel sangue è il neutrofilo a banda, che è uno stadio meno maturo di un neutrofilo segmentato. I neutrofili a banda si distinguono dai neutrofili maturi per la forma del loro nucleo, che manca della chiara segmentazione (un segmento è definito come una costrizione >50% nella larghezza del nucleo) e del contorno irregolare del neutrofilo maturo. In alcune situazioni, vengono rilasciati stadi precedenti alle bande (per esempio i metamielociti; vedi sotto). Uno spostamento a sinistra è solitamente (ma non sempre) accompagnato da un cambiamento tossico (il cambiamento tossico può non essere visto se c’è un lieve spostamento a sinistra o se c’è solo il rilascio di cellule immature dal midollo senza maturazione accelerata). Tuttavia, i neutrofili immaturi possono anche essere rilasciati prematuramente nei disturbi del midollo osseo, come la leucemia o gravi lesioni del midollo osseo (i neutrofili immaturi di solito non sono tossici neanche in questo contesto).

I neutrofili immaturi sono classificati in base al loro stadio di maturazione. Il precursore specifico più precocemente identificabile dei neutrofili è un mielocita, che si differenzia in un metamielocita, poi in un neutrofilo a banda e infine in un neutrofilo segmentato maturo. Solo il mielocita è capace di dividersi – tutti gli stadi più maturi (metamielocita, banda, neutrofilo segmentato) sono incapaci di dividersi (post-mitotici). Il criterio principale per differenziare i neutrofili immaturi gli uni dagli altri è la forma del loro nucleo, che inizia a rientrare o a restringersi man mano che la cellula matura. Un mielocita ha un nucleo rotondo, un metamielocita ha un nucleo rientrante o a forma di fagiolo e una banda ha un nucleo a ferro di cavallo o a lati paralleli (per un’immagine compilata dei neutrofili immaturi, si prega di fare riferimento alle pagine del cambio sinistro o del cambio tossico). È importante distinguere tra neutrofili immaturi e monociti, in particolare nel cane dove queste cellule possono assomigliare l’una all’altra (vedi monocito qui sotto). Questo si ottiene guardando tutte le caratteristiche della cellula (cromatina nucleare, forma nucleare, posizione nucleare nella cellula, colore del citoplasma, bordi citoplasmatici, presenza o assenza di vacuoli e granuli) di concerto (vedi immagine a destra).

Quando si esegue una conta cellulare differenziale, classifichiamo i neutrofili nella categoria “segmentati” se il nucleo ha regioni nettamente ristrette (più del 50% della larghezza del nucleo) o ha protrusioni laterali che risultano in margini nucleari irregolari. Una cellula i cui margini nucleari sono lisci e paralleli (o quasi) è un neutrofilo “a banda” e dovrebbe essere contato come tale. Stadi più immaturi sono classificati dalla loro forma nucleare, come descritto sopra. Si noti che le cellule tra questi stadi ben definiti saranno sempre viste nel sangue. In queste circostanze, la cellula in questione sarà collocata nella categoria più matura, cioè una cellula con caratteristiche nucleari a metà strada tra una banda e un neutrofilo segmentato sarà chiamata un neutrofilo segmentato. I neutrofili più immaturi possono essere contati separatamente come loro categorie specifiche o raggruppati come neutrofili “a banda”. Alla Cornell University, tutti i neutrofili immaturi (neutrofili a banda, metamielociti e mielociti) sono raggruppati nella categoria “banda” della nostra conta cellulare differenziale. Usando l’immagine qui sopra come esempio, le cellule da B a D verrebbero contate come “bande” e solo la cellula A verrebbe contata come un neutrofilo “segmentato”. Tuttavia, se osserviamo stadi meno maturi di un neutrofilo a banda (metamielocita o mielocita), forniamo questa informazione nei risultati (ad esempio, lo spostamento a sinistra si estende ai mielociti). La presenza di questi stadi più immaturi di solito indica un’infiammazione più grave rispetto alla sola presenza di neutrofili a banda.

Eosinofili

I granuli di eosinofili nella maggior parte degli animali sono arancioni ma ci sono sempre eccezioni, in particolare negli esotici. I granuli negli eosinofili delle iguane e di alcuni uccelli sono in realtà blu pallido. In generale, i nuclei degli eosinofili maturi sono più corti e meno segmentati dei nuclei dei neutrofili e il citoplasma, se visibile, è blu chiaro. Esiste una marcata variazione di specie per quanto riguarda il numero, la dimensione e la forma dei granuli degli eosinofili.

La maggior variazione intraspecie si trova negli eosinofili del cane. Una marcata variazione nella dimensione, nel numero e nella forma dei granuli si verifica all’interno e tra gli individui di qualsiasi razza. Una variante morfologica specifica e prevedibile dell’eosinofilo si vede nei levrieri, in altri levrieri (per esempio, Whippets, Deerhounds) e in alcuni Golden Retriever. Gli eosinofili in queste razze mancano di granuli visibili e appaiono come cellule con nuclei leggermente segmentati, citoplasma grigio e vacuoli. A volte vengono scambiati per neutrofili o monociti tossici e vengono chiamati eosinofili “vacuolati” o “grigi” (vedere immagini rappresentative di questi eosinofili nella galleria del sangue del cane nell’album di ematologia). Sull’analizzatore ematologico ADVIA, si spostano nel gate dei monociti (contengono meno perossidasi dei neutrofili o degli eosinofili granulati normali).

Basofili

I basofili prototipici del sangue umano sono pieni di piccoli granuli rotondi e viola scuro. Basofili simili si trovano in cavalli, camelidi e ruminanti. Queste cellule contengono molti piccoli granuli viola scuro che oscurano il nucleo in molte cellule. Alcuni basofili hanno pochi granuli, il che probabilmente è il risultato della degranulazione nel campione. Un basso numero di basofili si trova comunemente nel sangue di bovini e cavalli sani, ma meno nei camelidi.

I basofili canini sono difficili da riconoscere perché molti non hanno granuli facilmente visibili. Questo perché i granuli sono di colore lavanda pallido rispetto al viola. Le principali caratteristiche identificative dei basofili canini sono il nucleo lungo e ripiegato, descritto come “a nastro”, e l’insolita tonalità grigio-lavanda del citoplasma. Alcuni basofili contengono alcuni ovvi granuli viola chiaro (i granuli sono più facili da vedere nelle cellule che sono rotte). I basofili sono rari nel sangue dei cani sani. I basofili felini sono imballati con piccoli granuli leggermente ovali che sono di colore lavanda chiaro piuttosto che viola scuro. Il nucleo in molti sembra avere dei vacuoli, che in realtà sono granuli che giacciono sopra la cromatina. I basofili sono rari nel sangue dei gatti sani.

Linfociti

La maggior parte dei linfociti che circolano nei cani sani, gatti, camelidi e cavalli sono piccole cellule (mature) che hanno nuclei rotondi con cromatina liscia e densa e un piccolo bordo di citoplasma azzurro. La cromatina è così densa perché è per lo più eterocromatina (la cellula non sta trascrivendo attivamente il DNA). I linfociti devono essere distinti dai globuli rossi nucleati (vedi sotto). Alcuni linfociti in tutte le specie possono avere una maggiore quantità di citoplasma da blu molto chiaro a incolore. Questi non sono chiamati reattivi ma sono semplicemente considerati come “varianti” normali. Alcuni linfociti sono leggermente più grandi e hanno un modello di cromatina più fine e più sciolto. I linfociti trovati nel sangue dei ruminanti normali hanno un aspetto piuttosto variabile. Molti sono linfociti intermedi con una cromatina a grumi e un citoplasma abbastanza abbondante. Non tutti i linfociti negli strisci di sangue sono rotondi. Alcuni sono distorti in altre forme dalle forze meccaniche applicate loro durante lo striscio e alcuni sono modellati dal contatto con i globuli rossi. Generalmente misuriamo i linfociti in base alle loro dimensioni nucleari in relazione ai neutrofili (che hanno le stesse dimensioni in tutte le specie) come mostrato nella tabella sottostante. Inoltre, i linfociti normali devono essere differenziati dai globuli rossi nucleati, dai linfociti reattivi e dalle cellule neoplastiche (che potrebbero essere mieloidi o linfoidi). Maggiori informazioni su questo punto sono fornite di seguito.

Dimensione dei linfociti

Dimensione dei linfociti	Dimensione del nucleo in relazione a un neutrofilo
Piccolo	Il nucleo del linfocita può entrare dentro un neutrofilo
Intermedio	Il nucleo del linfocita ha le stesse dimensioni di un neutrofilo
Grande	Il neutrofilo può entrare nel nucleo.

Altri linfociti che possono essere visti nel sangue sono:

• I linfociti “reattivi” sono associati ad una risposta immunitaria. Possono variare nelle dimensioni (da piccole a grandi), ma hanno una cromatina a grumi (eterocromatina) e di solito una quantità maggiore di citoplasma blu più profondo che è abbastanza liscio. Alcuni possono avere vacuoli citoplasmatici chiari. È importante differenziare i grandi linfociti reattivi dai “blasti” associati a una leucemia (vedi sotto). Usiamo una varietà di tecniche per distinguerli, comprese le caratteristiche citologiche, i risultati clinici e il resto dei risultati dell’emogramma. I linfociti reattivi possono essere visti in qualsiasi animale ma sono abbastanza comuni nel sangue di animali giovani, specialmente quelli che sono stati vaccinati di recente.
• Linfociti granulari: Anche questi si trovano in basso numero negli animali sani (comprendono tra l’1-10% di tutti i linfociti). I linfociti granulari si distinguono per la presenza di piccoli granuli rossi raccolti in un’area del citoplasma, solitamente all’interno di una rientranza del nucleo. I linfociti granulari sono cellule T citotossiche o cellule natural killer. Un numero aumentato di linfociti granulari può essere visto in condizioni reattive (per esempio infezione da Ehrlichia canis nei cani, malattia renale cronica nei cani) o come parte di una leucemia primaria (leucemia dei linfociti granulari).

Linfociti vs. globuli rossi nucleati

Stadi molto tardivi di nRBC, come il metarubricita, si distinguono dai linfociti per il loro citoplasma policromatofilo e nuclei picnotici. Gli stadi precedenti, come il rubricyte basofilo, anche se più problematici, hanno un citoplasma blu più profondo e un pattern di cromatina più grossolanamente condensato rispetto al linfocita.

Il contesto generale dello striscio può anche essere preso in considerazione; ad esempio, ci si aspetta che le nRBC accompagnino una marcata policromasia (risposta rigenerativa). Questo non è vero nei camelidi e nei gatti, dove gli nRBC si vedono frequentemente nel sangue in varie situazioni, non solo nelle anemie rigenerative.

Linfociti reattivi contro blasti

È importante distinguere le grandi cellule ematopoietiche reattive da quelle neoplastiche (“blasti”). Questi ultimi non si vedono in animali normali ma solo in animali con neoplasia ematopoietica (leucemia acuta, linfoma con una fase leucemica o raramente nella sindrome mielodisplastica). Si noti che differenziare i linfociti reattivi dai “blasti” leucemici può essere molto difficile in animali con un basso numero di cellule problematiche, le cosiddette cellule “big blue”. La presenza di cellule neoplastiche indica una leucemia, mentre i linfociti reattivi indicano una stimolazione antigenica (significati molto diversi). La ragione per cui chiamiamo le cellule “blasti” è che non possiamo determinare definitivamente il loro lignaggio dalle loro caratteristiche morfologiche; sono necessari altri strumenti, come l’immunofenotipizzazione e la colorazione citochimica. Per maggiori informazioni su come distinguere tra questi due tipi molto diversi di leucociti nel sangue (reattivi o neoplastici), fare riferimento alla pagina delle cellule “big blue”.

Monociti

I monociti sono il leucocita che è il più problematico per l’identificazione, perché possono essere abbastanza variabili nelle dimensioni e nell’aspetto. Sono spesso più grandi dei neutrofili e sono di solito il leucocita più grande, ma non ci sono differenze coerenti di specie. Il nucleo può essere rotondo, a forma di rene o pseudo-lobulato (può imitare un neutrofilo). Può anche occasionalmente essere a forma di banda, specialmente nei cani, e può essere confuso con i neutrofili a banda. Tuttavia, la cromatina dei monociti è meno densa di quella dei neutrofili, ed è descritta come merlettata o leggermente raggrumata. Il citoplasma è solitamente liscio e blu-grigio e può contenere alcuni vacuoli di dimensioni variabili, e occasionalmente alcuni granuli rosa-rosso molto fini. Alcuni, come il monocito equino, assomigliano ai linfociti. La struttura del citoplasma in un monocito è leggermente granulosa o grossolana rispetto al citoplasma dei linfociti, che è molto liscio e vitreo.

Collegamenti correlati

• Interpretazione dei cambiamenti nel numero di leucociti individuali e presenza di leucociti anormali nel sangue, ad esempio mastociti, istiociti.
• Modelli leucocitari: Leucocitosi fisiologica, leucogramma da stress, leucogramma infiammatorio, leucemia
• Caratteristiche morfologiche dei nRBC e interpretazione del numero aumentato nel sangue.
• Caratteristiche morfologiche dei neutrofili immaturi
• Caratteristiche morfologiche del cambiamento tossico nei neutrofili.
• Guida rapida ai test: Guida rapida per l’interpretazione dei cambiamenti nei risultati dei test ematologici
• Atlante: Per compilazioni di immagini.