Normális leukociták

A leukociták öt fő kategóriája az emlősökben a neutrofilek, eozinofilek, bazofilek, limfociták és monociták. Az első hármat együttesen granulocitáknak nevezzük, mivel citoplazmájukban szemcséket tartalmaznak, az utóbbi kettőt pedig együttesen mononukleáris sejteknek nevezzük kerek sejtmagjukra utalva. Ezek a gyűjtőnevek némileg félrevezetőek, mivel egyes granulocitáknak alig észrevehető szemcséi vannak, és a legtöbb monocitának nincs kerek magja. A legtöbb emlős granulocitáit neutrofil, eozinofil és bazofil csoportba sorolják a specifikus granulocitáiknak a polikróm vérfestékek, az úgynevezett Romanowsky-festékek festékanyagával való reakciója alapján.

A granulociták osztályozásának prototípusa az ember, amelyben a neutrofil granulumok kicsik és rózsaszínűek, gyenge affinitással az azozinkomplexekhez, a bazofil granulumok mélylila színűek az azozinkomplexekhez való erős affinitás miatt, az eozinofilek pedig intenzíven narancsszínűek az eozin erős kötődése miatt. Az állatfajok granulocitáinak osztályozása részben az emberi granulociták megjelenésének homológiáján, részben pedig az enzimtartalom és funkció homológiájának kimutatásán alapul.

A fajok között és a fajokon belül is számos, részben finom, részben nyilvánvaló különbség van.

Az érett neutrofilek

Szinonimák: Polymorfonukleáris sejt (PMN), szegmentált neutrofilek

A szegmentált neutrofil, vagy a madarak, hüllők és egyes emlősök esetében a heterofil, az uralkodó granulocita. Sok fajban ez az uralkodó leukocita az egészségben. Egészségben általában csak érett neutrofilek szabadulnak fel a csontvelőből, hogy a vérben keringjenek. Mivel a prototípusos emberi vérben az érett neutrofilek sejtmagja szegmentált, fonalakkal összekapcsolt, kondenzált kromatinból álló lebenyekre tagolódik, az érett neutrofileket szegmentált neutrofileknek (“szegs” vagy “neuts”) nevezik. Számos állatfaj érett neutrofileknek nincs határozott lebeny- és fonalas elrendeződésük (szűkült sejtmagjuk vagy szabálytalan/csomós sejtmag körvonaluk van), ennek ellenére ezeket is szegmentált neutrofileknek nevezik. A neutrofilek a veleszületett immunrendszer részét képezik, és a bakteriális kórokozók elleni védekezés első vonalát jelentik (és elengedhetetlenek). A neutrofilek felezési ideje rövid – a perifériás vérbe kerülésük után csak 10-15 órán át maradnak fenn (Carakostas és mtsai. 1981). A vér elemzésekor csak a keringő neutrofil poolból veszünk mintát, a csontvelőben lévő margináló vagy tartalék poolból nem. A legtöbb fajban, kivéve a macskákat, a keringő és a margináló pool aránya 1:1 (Carakostas et al 1981) (lovaknál becslések szerint 3:1). A neutrofilek felszabadulása a margináló poolból (endogén vagy exogén) kortikoszteroidok hatására történik, amelyek a marginalizációért felelős adhéziós molekulákat (vagy az endotheliumon való járőrözést a szelektin-mediált gördülés révén) szabályozzák le, és képesek megduplázni az érett neutrofilek számát (ún. “stressz-leukogram”).

Éretlen neutrofilek

Egyes állatoknál a perifériás vérben éretlen neutrofilek láthatók, jelenlétüket balra tolódásnak nevezik. Az éretlen neutrofilek megnövekedett számának jelenléte (azaz az adott fajra megállapított referenciaintervallum felett) általában gyulladásos citokinekre adott választ és gyulladásos leukogramot jelez. A vérben észlelt éretlen neutrofilek leggyakoribb típusa a sávos neutrofil, amely egy fokkal kevésbé érett, mint a szegmentált neutrofil. A sávos neutrofileket az érett neutrofilektől a sejtmagjuk alakja különbözteti meg, amelyből hiányzik az érett neutrofilek egyértelmű szegmentációja (a szegmentumot a sejtmag szélességének >50%-os szűkületeként határozzák meg) és szabálytalan körvonala. Bizonyos helyzetekben a sávoknál korábbi stádiumok is megjelennek (pl. metamyelociták; lásd alább). A balra tolódást általában (de nem mindig) toxikus változás kíséri (a toxikus változás nem feltétlenül látható, ha enyhe balra tolódásról van szó, vagy ha csak éretlen sejtek szabadulnak fel a csontvelőből gyorsított érés nélkül). Az éretlen neutrofilek azonban idő előtt is felszabadulhatnak csontvelő-rendellenességek, például leukémia vagy súlyos csontvelő-sérülés esetén (az éretlen neutrofilek általában ebben a helyzetben sem toxikusak).

Az éretlen neutrofileket érési stádiumuk alapján osztályozzák. A legkorábban azonosítható specifikus neutrofil prekurzor a myelocita, amely metamyelocitává, majd sávos neutrofillá, végül érett szegmentált neutrofillá differenciálódik. Csak a myelocita képes osztódásra – az összes érettebb stádium (metamyelocita, sávos, szegmentált neutrofil) nem képes osztódásra (posztmitotikus). Az éretlen neutrofilek egymástól való megkülönböztetésének elsődleges kritériuma a sejtmag alakja, amely a sejt érésével elkezd behúzódni vagy összeszűkülni. A myelocita sejtmagja kerek, a metamyelocita sejtmagja behúzott vagy vese-bab alakú, a sávos sejtmagja pedig lópatkó vagy párhuzamos oldalú (az éretlen neutrofilekről összeállított képet lásd a balra váltás vagy a toxikus változás oldalon). Fontos különbséget tenni az éretlen neutrofilek és a monociták között, különösen kutyában, ahol ezek a sejtek hasonlíthatnak egymásra (lásd alább a monocitáknál). Ez úgy érhető el, hogy a sejt összes jellemzőjét (magkromatin, mag alakja, mag elhelyezkedése a sejtben, citoplazma színe, citoplazmahatárok, vakuolumok és granulumok jelenléte vagy hiánya) együttesen vizsgáljuk (lásd a jobb oldali képet).

A sejtek differenciálszámlálása során a neutrofileket a “szegmentált” kategóriába soroljuk, ha a sejtmagnak vannak olyan régiói, amelyek határozottan szűkültek (a sejtmag szélességének több mint 50%-ánál), vagy oldalsó kiemelkedésekkel rendelkeznek, amelyek szabálytalan magszegélyeket eredményeznek. Az a sejt, amelynek magperemei sima és párhuzamosak (vagy közel párhuzamosak), “sávos” neutrofil, és ekként kell számolni. Az éretlenebb stádiumokat a fent leírtak szerint a mag alakja alapján osztályozzák. Megjegyzendő, hogy e jól meghatározott stádiumok közötti sejtek mindig megjelennek a vérben. Ilyen körülmények között a kérdéses sejtet az érettebb kategóriába soroljuk, azaz a sávos és a szegmentált neutrofil sejtek között félúton elhelyezkedő sejtet szegmentált neutrofilnak nevezzük. Az éretlenebb neutrofileket külön-külön is számon lehet tartani, mint sajátos kategóriájukat, vagy “sávos” neutrofilekként lehet csoportosítani. A Cornell Egyetemen az összes éretlen neutrofil (sávos neutrofilek, metamyelociták és myelociták) a “sávos” kategóriába kerül a differenciálsejt-számlálásunkban. A fenti képet példaként használva a B-től D-ig terjedő sejteket “sávoknak” számítanánk, és csak az A sejtet számítanánk “szegmentált” neutrofilnak. Ha azonban olyan stádiumokat figyelünk meg, amelyek kevésbé érettek, mint egy sávos neutrofil (metamyelocita vagy myelocita), akkor ezt az információt megadjuk az eredményekben (pl. a balra tolódás a myelocitákra terjed ki). Ezeknek az éretlenebb stádiumoknak a jelenléte általában súlyosabb gyulladást jelez, mint pusztán a sávos neutrofilek jelenléte.

Eozinofilek

A legtöbb állatban az eozinofil szemcsék narancsszínűek, de mindig vannak kivételek, különösen az egzotikusoknál. A leguánok és néhány madár eozinofil szemcséi valójában halványkék színűek. Általában az érett eozinofilek magjai rövidebbek és kevésbé szegmentáltak, mint a neutrofilek magjai, és a citoplazma, ha látható, halványkék. Az eozinofil szemcsék számát, méretét és alakját illetően markáns faji eltérések vannak.

A legnagyobb fajon belüli eltérés a kutyák eozinofiljeinél tapasztalható. A szemcsék méretében, számában és alakjában markáns eltérés mutatkozik bármely fajta egyedei között és azokon belül is. Az eozinofilok specifikus és kiszámítható morfológiai változata agaraknál, más kopóknál (pl. whippeteknél, szarvaskutyáknál) és egyes golden retrievereknél figyelhető meg. Ezekben a fajtákban az eozinofilekből hiányoznak a látható szemcsék, és enyhén szegmentált sejtmaggal, szürke citoplazmával és vakuolumokkal rendelkező sejtekként jelennek meg. Ezeket néha összetévesztik a toxikus neutrofilekkel vagy monocitákkal, és “vacuolált” vagy “szürke” eozinofileknek nevezik őket (lásd az ilyen eozinofilek reprezentatív képeit a kutyavér galériában a hematológia albumban). Az ADVIA hematológiai analizátoron átsodródnak a monocita kapuba (kevesebb peroxidázt tartalmaznak, mint a neutrofilek vagy a normál granulált eozinofilek).

Bazofilok

A humán vér prototípusos basofiljai apró, kerek, sötétlila szemcsékkel vannak tele. Hasonló bazofilok találhatók lovaknál, teveféléknél és kérődzőknél is. Ezek a sejtek sok kis mélylila szemcsét tartalmaznak, amelyek sok sejtben eltakarják a sejtmagot. Néhány bazofilnak kevés szemcséje van, ami valószínűleg a mintában történő degranuláció eredménye. Az egészséges szarvasmarhák és lovak vérében általában alacsony számú bazofil található, a tevefélékében azonban kevésbé.

A kutyák bazofiljait nehéz felismerni, mivel sokuknak nincsenek jól látható szemcséi. Ennek oka, hogy a szemcsék halvány levendulaszínűek, szemben a lilával. A kutyabazofilok fő azonosító jellemzői a hosszú és összehajtott mag, amelyet “szalagszerűnek” írnak le, valamint a citoplazma szokatlan szürke vagy levendulaszínű árnyalata. Egyes bazofilok néhány nyilvánvaló világos lila szemcsét tartalmaznak (a szemcsék könnyebben láthatók a megrepedt sejteken). A bazofilok ritkák az egészséges kutyák vérében. A macskabazofilok apró, enyhén ovális szemcsékkel vannak tele, amelyek inkább halvány levendulaszínűek, mint mélylila színűek. A sejtmag sokukban vakuolumoknak tűnik, amelyek valójában a kromatin tetején fekvő szemcsék. A bazofilok ritkák az egészséges macskák vérében.

Lymphocyták

A legtöbb egészséges kutyában keringő limfocita, macskák, tevefélék és lovak kis (érett) sejtek, amelyeknek kerek sejtmagjuk van, sima, sűrű kromatinnal és világoskék citoplazma kis peremével. A kromatin azért ilyen sűrű, mert nagyrészt heterokromatin (a sejt nem írja át aktívan a DNS-t). A limfocitákat meg kell különböztetni a sejtmagvú vörösvértestektől (lásd alább). Néhány limfocitának minden fajban megnövekedett mennyiségű nagyon világoskék vagy színtelen citoplazmája lehet. Ezeket nem nevezzük reaktívnak, hanem csak normális “változatoknak” tekintjük. Egyes limfociták kissé nagyobbak és finomabb, lazább kromatinmintázatúak. A normál kérődzők vérében található limfociták meglehetősen változatos megjelenésűek. Sok közülük intermedier limfocita, lazán csomósodott kromatinnal és meglehetősen bőséges citoplazmával. A vérkenetben nem minden limfocita kerek. Néhányat a kenés során rájuk ható mechanikai erők más alakúvá torzítanak, néhányat pedig a vörösvértestekkel való érintkezés formál. A limfocitákat általában a neutrofilekhez viszonyított magméretük alapján méretezzük (amelyek mérete fajonként azonos), amint azt az alábbi táblázat mutatja. A normális limfocitákat is meg kell különböztetni a magvas vörösvértestektől, a reaktív limfocitáktól és a daganatos sejtektől (amelyek lehetnek myeloid vagy lymphoid sejtek). Erről bővebb információ az alábbiakban olvasható.

A limfociták mérete

Limfocita mérete	Magméret egy neutrofilhez viszonyítva
Kicsi	A limfocita magja befér. egy neutrofil belsejébe
Közepes	A limfocita magja ugyanolyan méretű, mint egy neutrofilé
Nagy	Neutrofil elfér a magban.

A vérben látható egyéb limfociták:

• A “reaktív” limfociták immunválaszhoz kapcsolódnak. Méretük változó lehet (kicsiktől a nagyokig), de csomósodott (heterokromatin) kromatinnal és általában megnövekedett mennyiségű mélykék citoplazmával rendelkeznek, amely meglehetősen sima. Néhányuknak világos citoplazmatikus vakuolumai lehetnek. Fontos megkülönböztetni a reaktív nagy limfocitákat a leukémiához társuló “blasztoktól” (lásd alább). Különböző technikákat használunk a megkülönböztetésükhöz, beleértve a citológiai jellemzőket, a klinikai leleteket és a hemogram többi eredményét. A reaktív limfociták bármely állatban előfordulhatnak, de meglehetősen gyakoriak a fiatal állatok vérében, különösen azokéban, amelyeket nemrég oltottak.
• Granuláris limfociták: Ezek az egészséges állatokban is kis számban fordulnak elő (az összes limfocita 1-10%-át teszik ki). A granuláris limfocitákat a citoplazma egy területére, általában a sejtmag bemélyedésén belül összegyűjtött kis vörös szemcsék jelenléte különbözteti meg. A granuláris limfociták vagy citotoxikus T-sejtek, vagy természetes ölősejtek. A granuláris limfociták megnövekedett száma megfigyelhető reaktív állapotokban (pl. Ehrlichia canis fertőzés kutyákban, krónikus vesebetegség kutyákban) vagy primer leukémia részeként (granuláris limfociták leukémiája).

Limfociták kontra nukleált vörösvértestek

A nagyon késői stádiumú nRBC-ket, például a metarubricitákat polikromatofil citoplazmájuk és pyknotikus magjuk különbözteti meg a limfocitáktól. A korábbi stádiumúak, mint például a bazofil rubricyták, bár nagyobb problémát jelentenek, a lymphocytákhoz képest mélyebb kék citoplazmával és durvábban kondenzált kromatinmintázattal rendelkeznek.

A kenet általános kontextusát is figyelembe lehet venni; pl. az nRBC-k várhatóan kifejezett polikromáziát kísérnek (regeneratív válasz). Ez nem igaz a tevefélékre és a macskákra, ahol nRBC gyakran látható a vérben különböző helyzetekben, nem csak regeneratív anémiákban.

Reaktív limfociták versus blastok

Nagyméretű reaktív és neoplasztikus vérképző sejtek (“blastok”) megkülönböztetése fontos. Ez utóbbiak nem fordulnak elő normális állatokban, hanem csak vérképzőszervi neopláziában (akut leukémia, leukémiás fázisú limfóma vagy ritkán myelodysplasticus szindróma) szenvedő állatokban. Megjegyzendő, hogy a reaktív limfociták és a leukémiás “blastok” megkülönböztetése nagyon nehéz lehet azokban az állatokban, amelyekben a problémás sejtek, az úgynevezett “nagy kék” sejtek száma alacsony. A neoplasztikus sejtek jelenléte leukémiára utal, míg a reaktív limfociták antigénstimulációra utalnak (nagyon eltérő jelentéssel). A sejteket azért nevezzük “blastoknak”, mert morfológiai jellemzőik alapján nem tudjuk egyértelműen meghatározni a sejtek származását; egyéb eszközökre, például immunfenotipizálásra és citokémiai festésre van szükség. Arról, hogy hogyan különböztetjük meg a vérben lévő leukociták e két nagyon különböző típusát (reaktív vagy neoplasztikus), a “nagy kék” sejtek oldalán olvashat bővebben.

Monociták

A monociták a leukociták, amelyek azonosítása a legproblémásabb, mivel méretük és megjelenésük tekintetében meglehetősen változatosak lehetnek. Gyakran nagyobbak, mint a neutrofilek, és általában a legnagyobb leukociták, de nincsenek következetes faji különbségek. A sejtmag lehet kerek, vese alakú vagy pszeudo-lobuláris (utánozhatja a neutrofilokat). Alkalmanként sáv alakú is lehet, különösen kutyáknál, és összetéveszthető a sávos neutrofilekkel. A monociták kromatinja azonban kevésbé sűrű, mint a neutrofileké, és a leírás szerint csipkés vagy enyhén csomós. A citoplazma általában sima és kékesszürke, és tartalmazhat néhány változó méretű vakuolt, valamint esetenként néhány nagyon finom rózsaszínű-vörös szemcsét. Egyesek, mint például a lómonociták, a limfocitákra hasonlítanak. A monociták citoplazmájának textúrája kissé szemcsés vagy durva, szemben a limfociták citoplazmájával, amely nagyon sima és üveges.

Kapcsolódó linkek

• Az egyes leukociták számában bekövetkezett változások és a vérben lévő rendellenes leukociták, pl. hízósejtek, hisztociták jelenlétének értelmezése.
• Leukocita minták: Fiziológiás leukocitózis, stressz leukocitogram, gyulladásos leukocitogram, leukémia
• A nRBC morfológiai jellemzői és a vérben megnövekedett számok értelmezése.
• A neutrofilek éretlen állapotának morfológiai jellemzői
• A neutrofilek toxikus változásának morfológiai jellemzői.
• Gyorsteszt útmutató: Gyors útmutató a hematológiai vizsgálati eredmények változásainak értelmezéséhez
• Atlasz: Képösszeállításokhoz.