Normaalit leukosyytit

Nisäkkäiden leukosyyttien viisi pääluokkaa ovat neutrofiilit, eosinofiilit, basofiilit, lymfosyytit ja monosyytit. Kolmea ensimmäistä kutsutaan yhdessä granulosyyteiksi, koska niiden sytoplasmassa on granuloita, ja kahta jälkimmäistä kutsutaan yhdessä mononukleaarisiksi soluiksi niiden pyöreiden ytimien perusteella. Nämä yhteisnimitykset ovat jokseenkin harhaanjohtavia, koska joillakin granulosyyteillä on tuskin havaittavia rakkuloita ja useimmilla monosyyteillä ei ole pyöreitä tumia. Useimpien nisäkkäiden granulosyytit luokitellaan neutrofiileihin, eosinofiileihin ja basofiileihin sen perusteella, miten niiden spesifiset rakeet reagoivat moniväristen verivärjäysten, niin sanottujen Romanowsky-värjäysten, väriaineiden kanssa.

Granulosyyttien luokittelun prototyyppilaji on ihminen, jonka neutrofiiliset granulukset ovat pieniä ja vaaleanpunaisia, ja niillä on heikko affiniteetti atsuurakomplekseihin, basofiilien granulukset ovat syvän purppuranpunaisia, koska niillä on voimakas affiniteetti atsuurakomplekseihin, ja eosinofiilien granulukset ovat voimakkaan oransseja, koska niillä on voimakas eosiinin sitoutuminen. Eläinlajien granulosyyttien luokittelu perustuu osittain ulkonäön homologisuuteen ihmisen granulosyyttien kanssa ja osittain entsyymien sisällön ja toiminnan homologisuuden osoittamiseen.

Lajien välillä ja lajien sisällä on monia eroja, joista osa on hienovaraisia ja osa ilmeisiä.

Kypsät neutrofiilit

Synonyymit: Polymorfonukleaarinen solu (PMN), segmentoituneet neutrofiilit

Segmentoitunut neutrofiili eli heterofiili linnuilla, matelijoilla ja joillakin nisäkkäillä on vallitseva granulosyytti. Monilla lajeilla se on vallitseva leukosyytti terveydentilassa. Terveenä yleensä vain kypsiä neutrofiilejä vapautuu luuytimestä kiertämään veressä. Koska ihmisveren prototyypin kypsillä neutrofiileillä on tumat, jotka ovat segmentoituneet filamenttien yhdistämiin tiivistetyn kromatiinin lohkoihin, kypsiä neutrofiilejä kutsutaan segmentoiduiksi neutrofiileiksi (”segs” tai ”neuts”). Monien eläinlajien kypsillä neutrofiileillä ei ole selkeää lohko- ja filamenttijärjestelyä (niillä on supistuneet ytimet tai epäsäännölliset / nystyräiset ydinkehät), mutta niitäkin kutsutaan kuitenkin segmentoiduiksi neutrofiileiksi. Neutrofiilit ovat osa synnynnäistä immuunijärjestelmää, ja ne ovat ensimmäinen (ja välttämätön) puolustuslinja bakteeripatogeeneja vastaan. Neutrofiilien puoliintumisaika on lyhyt – ne säilyvät perifeeriseen vereen päästyään vain 10-15 tuntia (Carakostas ym. 1981). Kun analysoimme verta, otamme näytteen vain kiertävästä neutrofiilivarastosta emmekä luuytimessä olevasta marginaali- tai reservivarastosta. Useimmilla lajeilla, kissoja lukuun ottamatta, kiertävän ja marginaalisen poolin suhde on 1:1 (Carakostas ym. 1981) (hevosilla se on arviolta 3:1). Neutrofiilejä vapautuu marginaalialtaasta vastauksena (endogeenisiin tai eksogeenisiin) kortikosteroideihin, jotka alentavat marginaatiosta (tai endoteelin kiertämisestä selektiini-välitteisen rullauksen avulla) vastaavien adheesiomolekyylien toimintaa, ja ne voivat kaksinkertaistaa kypsien neutrofiilien määrän (ns. stressileukogram).

Epäkypsät neutrofiilit

Joidenkin eläinten perifeerisessä veressä voi näkyä epäkypsiä neutrofiilejä, ja niiden esiintymistä kutsutaan vasemmanpuoleiseksi siirtymäksi. Lisääntynyt epäkypsien neutrofiilien määrä (eli yli kyseisen lajin vakiintuneen vertailuvälin) osoittaa yleensä vastetta tulehdussytokiineille ja tulehdusleukoomaa. Yleisin veressä havaittu epäkypsän neutrofiilin tyyppi on kaistaleinen neutrofiili, joka on yksi vaihe vähemmän kypsä kuin segmentoitu neutrofiili. Bändineutrofiilit eroavat kypsistä neutrofiileistä tuman muodon perusteella, sillä tuma ei ole selvästi segmentoitunut (segmentti määritellään >50 %:n supistumaksi tuman leveydessä) ja sen ääriviivat ovat epäsäännölliset kuin kypsissä neutrofiileissä. Joissakin tilanteissa vapautuu bändejä varhaisempia vaiheita (esim. metamyelosyytit; ks. jäljempänä). Vasemmanpuoleiseen siirtymään liittyy yleensä (mutta ei aina) toksinen muutos (toksista muutosta ei välttämättä havaita, jos vasemmanpuoleinen siirtymä on lievä tai jos luuytimestä vapautuu vain epäkypsiä soluja ilman nopeutettua kypsymistä). Epäkypsiä neutrofiilejä voi kuitenkin vapautua ennenaikaisesti myös luuytimen häiriöissä, kuten leukemiassa tai vaikeassa luuydinvauriossa (epäkypsät neutrofiilit eivät yleensä ole myrkyllisiä tässäkään tilanteessa).

Kypsymättömät neutrofiilit luokitellaan niiden kypsymisvaiheen perusteella. Varhaisin tunnistettava spesifinen neutrofiilien esiaste on myelosyytti, joka erilaistuu metamyelosyytiksi, sitten banduneutrofiiliksi ja lopulta kypsäksi segmentoiduksi neutrofiiliksi. Ainoastaan myelosyytti kykenee jakautumaan – kaikki kypsemmät vaiheet (metamyelosyytti, bändineutrofiili, segmentoitunut neutrofiili) ovat jakautumiskyvyttömiä (postmitoottisia). Ensisijainen kriteeri, jonka perusteella epäkypsät neutrofiilit voidaan erottaa toisistaan, on niiden tuman muoto, joka alkaa painautua tai supistua solun kypsyessä. Myelosyytin tuma on pyöreä, metamyelosyytin tuma on painautunut tai munuaispavun muotoinen ja bändin tuma on hevosenkengän tai yhdensuuntaisen sivun muotoinen (koottua kuvaa epäkypsistä neutrofiileistä löydät vasemmanpuoleisen siirtymän tai toksisen muutoksen sivuilta). On tärkeää erottaa toisistaan epäkypsät neutrofiilit ja monosyytit, erityisesti koiralla, jolla nämä solut voivat muistuttaa toisiaan (ks. monosyytti jäljempänä). Tämä onnistuu tarkastelemalla kaikkia solun piirteitä (ydinkromatiini, ytimen muoto, ytimen sijainti solussa, sytoplasman väri, sytoplasman rajat, vacuolien ja granuloiden esiintyminen tai puuttuminen) yhdessä (ks. kuva oikealla).

Tehdessämme solujen erotuslaskentaa luokittelemme neutrofiilit luokkaan ”segmentoituneet”, jos ytimessä on selvästi supistuneita alueita (yli 50 % ytimen leveydestä) tai jos siinä on sivusuuntaisia ulokkeita, jotka johtavat epäsäännöllisiin ytimen reunoihin. Solu, jonka ydinreunat ovat sileät ja yhdensuuntaiset (tai lähes yhdensuuntaiset), on ”kaistaleinen” neutrofiili, ja se olisi laskettava sellaiseksi. Epäkypsemmät vaiheet luokitellaan ytimen muodon perusteella, kuten edellä on kuvattu. Huomaa, että näiden tarkoin määriteltyjen vaiheiden välissä olevia soluja nähdään aina veressä. Näissä olosuhteissa kyseinen solu sijoitetaan kypsempään luokkaan, eli solua, jonka ydin on puolivälissä kaistaleen ja segmentoidun neutrofiilin välillä, kutsutaan segmentoiduksi neutrofiiliksi. Epäkypsemmät neutrofiilit voidaan laskea erikseen omiin luokkiinsa tai ne voidaan ryhmitellä yhteen ”bändi”-neutrofiileiksi. Cornellin yliopistossa kaikki epäkypsät neutrofiilit (kaistaleutrofiilit, metamyelosyytit ja myelosyytit) ryhmitellään ”kaistale”-luokkaan solujen erotuslaskennassa. Käytettäessä yllä olevaa kuvaa esimerkkinä solut B-D luettaisiin ”bändeiksi” ja vain solu A luettaisiin ”segmentoiduksi” neutrofiiliksi. Jos kuitenkin havaitsemme vaiheita, jotka ovat vähemmän kypsiä kuin neutrofiilibändi (metamyelosyytti tai myelosyytti), ilmoitamme tämän tiedon tuloksissa (esim. vasemmanpuoleinen siirtymä ulottuu myelosyytteihin). Näiden epäkypsempien vaiheiden esiintyminen viittaa yleensä vakavampaan tulehdukseen kuin pelkkien bändineutrofiilien esiintyminen.

Eosinofiilit

Eosinofiilisten granulaatioiden väri on useimmilla eläimillä oranssi, mutta poikkeuksia on aina, erityisesti eksoottisilla eläimillä. Leguaanien ja joidenkin lintujen eosinofiilien granulat ovat itse asiassa vaaleansinisiä. Yleensä kypsien eosinofiilien tumat ovat lyhyempiä ja vähemmän segmentoituneita kuin neutrofiilien tumat, ja sytoplasma, jos se on näkyvissä, on vaaleansinistä. Eosinofiilirakkuloiden lukumäärän, koon ja muodon suhteen on huomattavaa lajikohtaista vaihtelua.

Lajinsisäistä vaihtelua esiintyy eniten koirien eosinofiileissä. Rakeiden koossa, lukumäärässä ja muodossa esiintyy merkittävää vaihtelua minkä tahansa rodun yksilöiden sisällä ja välillä. Eosinofiilien spesifinen ja ennakoitavissa oleva morfologinen muunnos esiintyy vinttikoirilla, muilla vinttikoirilla (esim. whippetillä, deerhoundilla) ja joillakin kultaisilla noutajilla. Näiden rotujen eosinofiileistä puuttuvat näkyvät rakeet, ja ne ovat soluja, joissa on hieman segmentoitunut tuma, harmaa sytoplasma ja vakuoleja. Niitä sekoitetaan joskus toksisiin neutrofiileihin tai monosyytteihin, ja niitä kutsutaan ”tyhjätaskuisiksi” tai ”harmaiksi” eosinofiileiksi (katso edustavia kuvia näistä eosinofiileistä koiran verigalleriasta hematologia-albumista). ADVIA-hematologian analysaattorissa ne ajautuvat monosyyttiporttiin (sisältävät vähemmän peroksidaasia kuin neutrofiilit tai normaalit granuloidut eosinofiilit).

Basofiilit

Miesveren prototyyppiset basofiilit täyttyvät pienistä, pyöreistä tummanpurppuranpunaisista granuloista. Samanlaisia basofiilejä on hevosilla, kamelieläimillä ja märehtijöillä. Näissä soluissa on paljon pieniä syvän purppuranpunaisia rakkuloita, jotka peittävät monissa soluissa tuman. Joissakin basofiileissä on vähän rakeita, mikä johtuu todennäköisesti näytteessä tapahtuneesta degranulaatiosta. Terveiden nautojen ja hevosten verestä löytyy yleisesti vähän basofiilejä, mutta vähemmän kamelieläimistä.

Soirien basofiilejä on vaikea tunnistaa, koska monissa niistä ei ole helposti havaittavia rakkuloita. Tämä johtuu siitä, että rakeet ovat vaalean laventelinvärisiä tai violetteja. Koiran basofiilien tärkeimmät tuntomerkit ovat pitkä ja taiteltu tuma, jota kuvataan ”nauhamaiseksi”, ja sytoplasman epätavallinen harmaasta laventeliin vaihteleva sävy. Joissakin basofiileissä on muutamia selviä vaalean purppuranpunaisia rakkuloita (rakkulat ovat helpommin havaittavissa soluissa, jotka ovat revenneet). Basofiilit ovat harvinaisia terveiden koirien veressä. Kissan basofiileissä on pieniä, hieman soikeita rakeita, jotka ovat pikemminkin vaalean laventelinvärisiä kuin syvän violetteja. Monien ytimessä näyttää olevan vakuoleja, jotka itse asiassa ovat kromatiinin päällä olevia rakkuloita. Basofiilit ovat harvinaisia terveiden kissojen veressä.

Lymfosyytit

Suuri osa terveiden koirien verenkierrossa olevista lymfosyyteistä, kissat, kamelieläimet ja hevoset ovat pieniä (kypsiä) soluja, joilla on pyöreät tumat, joissa on sileä, tiheä kromatiini ja pieni reunus vaaleansinistä sytoplasmaa. Kromatiini on niin tiheää, koska se on enimmäkseen heterokromatiinia (solu ei aktiivisesti kirjoita DNA:ta). Lymfosyytit on erotettava tuman omaavista punasoluista (ks. jäljempänä). Joissakin kaikkien lajien lymfosyyteissä voi olla lisääntynyt määrä hyvin vaaleansinistä tai väritöntä sytoplasmaa. Näitä ei kutsuta reaktiivisiksi, vaan niitä pidetään vain normaaleina ”variantteina”. Jotkin lymfosyytit ovat hieman suurempia ja niillä on hienompi, löysempi kromatiinikuvio. Normaalien märehtijöiden verestä löytyvät lymfosyytit ovat ulkonäöltään varsin vaihtelevia. Monet niistä ovat intermediäärisiä lymfosyyttejä, joissa on löyhästi kromatiinia ja melko runsaasti sytoplasmaa. Kaikki verenäytteissä olevat lymfosyytit eivät ole pyöreitä. Jotkin niistä ovat vääristyneet muuhun muotoon mekaanisten voimien vaikutuksesta, joita niihin kohdistuu preparoinnin aikana, ja jotkin ovat muovautuneet kosketuksessa punasolujen kanssa. Lymfosyytit mitoitetaan yleensä niiden ydinkoon perusteella suhteessa neutrofiileihin (jotka ovat samankokoisia kaikissa lajeissa), kuten alla olevasta taulukosta käy ilmi. Normaalit lymfosyytit on myös erotettava ydintyneistä punasoluista, reaktiivisista lymfosyyteistä ja neoplastisista soluista (jotka voivat olla myelooisia tai lymfaattisia). Tästä annetaan lisätietoja jäljempänä.

Lymfosyyttien koko

Lymfosyytin koko	Tytimen koko suhteessa neutrofiiliin
Pieni	Lymfosyytin ydin mahtuu neutrofiilin sisälle
Keskikokoinen	Lymfosyytin ydin on samankokoinen kuin neutrofiilin
Suuri	Neutrofiili mahtuu ytimen sisään.

Muut lymfosyytit, joita voidaan nähdä veressä ovat:

• ”Reaktiiviset” lymfosyytit liittyvät immuunivasteeseen. Ne voivat vaihdella kooltaan (pienistä suuriin), mutta niissä on kromatiinia (heterokromatiinia), joka on rykelmöitynyt, ja yleensä lisääntynyt määrä syvänsinistä sytoplasmaa, joka on melko sileää. Joissakin voi olla selkeitä sytoplasman vakuoleja. On tärkeää erottaa reaktiiviset suuret lymfosyytit leukemiaan liittyvistä ”blasteista” (ks. jäljempänä). Käytämme erilaisia tekniikoita niiden erottamiseksi toisistaan, mukaan lukien sytologiset piirteet, kliiniset löydökset ja muut hemogrammitulokset. Reaktiivisia lymfosyyttejä voi esiintyä missä tahansa eläimessä, mutta ne ovat melko yleisiä nuorten eläinten veressä, erityisesti äskettäin rokotettujen eläinten veressä.
• Rakeiset lymfosyytit: Näitäkin esiintyy vähän terveissä eläimissä (1-10 % kaikista lymfosyyteistä). Granulaariset lymfosyytit erottuvat toisistaan siitä, että ne sisältävät pieniä punaisia rakeita, jotka on kerätty yhdelle sytoplasman alueelle, tavallisesti tuman sisennyksen sisään. Granulaariset lymfosyytit ovat joko sytotoksisia T-soluja tai luonnollisia tappajasoluja. Lisääntyneitä granulaarisia lymfosyyttejä voidaan nähdä reaktiivisissa tiloissa (esim. Ehrlichia canis -infektio koirilla, krooninen munuaissairaus koirilla) tai osana primaarista leukemiaa (granulaaristen lymfosyyttien leukemia).

Lymfosyytit vs. nukleoituneet punasolut

Hyvin myöhäisvaiheessa olevat nRBC:t, kuten metarubrisyytit, eroavat lymfosyyteistä polykromatofiilisen sytoplasmansa ja pyknoottisen tumansa perusteella. Varhaisemmissa vaiheissa, kuten basofiilisessä rubrisyytissä, vaikka ne ovatkin ongelmallisempia, sytoplasma on syvänsinisempää ja kromatiinikuvio karkeammin tiivistetty kuin lymfosyytissä.

Värjäyksen yleinen konteksti voidaan myös ottaa huomioon; esim. nRBC-verrokkien odotetaan kulkevan merkittävän polykromaattisuuden mukana (regeneratiivinen vaste). Tämä ei päde kamelideihin ja kissoihin, joiden veressä nähdään usein nRBC:tä eri tilanteissa, ei ainoastaan regeneratiivisissa anemioissa.

Reaktiiviset lymfosyytit vs. blastit

On tärkeää erottaa toisistaan suuret reaktiiviset ja neoplastiset hematopoieettiset solut (”blastit”). Jälkimmäisiä ei esiinny normaaleissa eläimissä, vaan ainoastaan eläimissä, joilla on hematopoieettinen neoplasia (akuutti leukemia, lymfooma, jossa on leukeeminen vaihe tai harvoin myelodysplastinen oireyhtymä). On huomattava, että reaktiivisten lymfosyyttien erottaminen leukeemisista ”blasteista” voi olla hyvin vaikeaa eläimissä, joissa on vähän ongelmallisia soluja, niin sanottuja ”suuria sinisiä” soluja. Neoplastisten solujen läsnäolo viittaa leukemiaan, kun taas reaktiiviset lymfosyytit viittaavat antigeeniseen stimulaatioon (hyvin erilaiset merkitykset). Kutsumme soluja ”blasteiksi” siksi, että niiden morfologisten ominaisuuksien perusteella emme voi yksiselitteisesti määrittää niiden sukulinjaa; tarvitaan muita välineitä, kuten immunofenotyypin määritystä ja sytokemiallisia värjäyksiä. Lisätietoja siitä, miten erotamme nämä kaksi hyvin erilaista leukosyyttityyppiä veressä (reaktiiviset tai neoplastiset), on ”iso sininen” solu -sivulla.

Monosyytit

Monosyytit ovat identifioinnissa ongelmallisin leukosyyttityyppi, koska ne voivat vaihdella kooltaan ja ulkonäöltään melko paljon. Ne ovat usein suurempia kuin neutrofiilit ja ovat yleensä suurin leukosyytti, mutta johdonmukaisia lajieroja ei ole. Tuma voi olla pyöreä, munuaisen muotoinen tai pseudolobulaarinen (voi jäljitellä neutrofiilia). Se voi toisinaan olla jopa nauhanmuotoinen, erityisesti koirilla, ja se voidaan sekoittaa nauhanmuotoisiin neutrofiileihin. Monosyyttien kromatiini on kuitenkin vähemmän tiheää kuin neutrofiilien, ja sitä kuvataan pitsimäiseksi tai hieman kyhmyiseksi. Sytoplasma on yleensä sileää ja siniharmaata, ja siinä voi olla muutamia vaihtelevan kokoisia vakuoleja ja toisinaan muutamia hyvin hienoja vaaleanpunaisia rakeita. Jotkut, kuten hevosen monosyytit, muistuttavat lymfosyyttejä. Monosyytin sytoplasman rakenne on hieman rakeinen tai karkea verrattuna lymfosyyttien sytoplasmaan, joka on hyvin sileää ja lasimaista.

Linkkejä

• Tulkinta yksittäisten leukosyyttien lukumäärän muutoksista ja epänormaalien leukosyyttien esiintymisestä veressä, esim. syöttösolut, histiosyytit.
• Leukosyyttien mallit: Fysiologinen leukosytoosi, stressileukogrammi, tulehdusleukogrammi, leukemia
• NRBC:n morfologiset piirteet ja lisääntyneiden lukumäärien tulkinta veressä.
• Kypsymättömien neutrofiilien morfologiset piirteet
• Neutrofiilien myrkyllisen muutoksen morfologiset piirteet.
• Pikatestausopas: Pikaopas hematologisten testitulosten muutosten tulkintaan
• Atlas: Kuvakokoelmia varten.