Arviolta 90 % kaikista karsinogeeneistä on myös mutageenejä. Alun perin tohtori Bruce Amesin ja hänen kollegoidensa kehittämässä Ames-testissä käytetään muunnettuja bakteereja, jotka ovat herkkiä mutageenisille aineille, arvioimaan yhdisteen kykyä aiheuttaa suoria DNA-mutaatioita. Käänteiset mutaatiotapahtumat saavat bakteerit palaamaan protrofiseen tilaan ja kasvamaan valittuja ravintoaineita sisältämättömällä elatusaineella. Tätä testiä kutsutaan Salmonella Ames Salmonella/mikrosomimutageenisuusmääritykseksi (Salmonella-testi; Ames-testi), ja sitä on käytetty useiden tunnettujen syöpää aiheuttavien aineiden mutageenisten mekanismien vahvistamiseen sekä uusien, aiemmin tuntemattomien syöpää aiheuttavien aineiden löytämiseen kuluttajatuotteista. Food and Drug Administration (FDA) käyttää nykyään Amesin testiä monien kemikaalien seulontaan nopeasti ja edullisesti. Niitä harvoja kemikaaleja, jotka Amesin testin perusteella vaikuttavat mutageenisilta, testataan edelleen eläimillä niiden karsinogeenisen tehon arvioimiseksi.
Amesin testissä käytettäväksi on kehitetty monia erilaisia testikantoja, jotka koostuvat sekä Salmonella typhimuriumista että Escherichia colista ja jotka havaitsevat tietyntyyppisiä mutaatioita, kuten emäspari- tai frameshift-mutaatioita, ja jotka ovat herkempiä tietyille aineille. Testiin tehdyt parannukset ovat lisänneet kantojen herkkyyttä yhdisteiden pääsylle, lisänneet puutteellisia DNA:n korjausmekanismeja ja lisänneet metabolista bioaktivointikykyä. Alkuperäinen valumalevymenetelmä on myös suurelta osin korvattu uudemmalla fluktuointimenetelmällä, jossa käytetään nestemäistä altistusta, inkubaatio- ja palautusvaihetta ja jossa bakteerien kasvun osoittamiseen käytetään kolorimetristä pH-indikaattoria. Nämä parannukset ovat yhdessä alentaneet havaitsemisrajoja, lisänneet havaittavien yhdisteiden valikoimaa, mahdollistaneet korkean läpimenotehon mukauttamisen ja tehneet määrityksestä biologisesti merkityksellisemmän ihmisten kannalta. EBPI tarjoaa monia eri määritysvaihtoehtoja kuhunkin jäljempänä kuvattuun kolmeen kit-menetelmään, jotta mutaatioanalyysisi onnistuminen voidaan varmistaa.
Muta-ChromoPlate™ Basic Kit
5051 Muta-ChromoPlate Basic Kit (Sisältää 1 bakteerin, reagenssit, kontrollit ja muovit)
B5051 Muta-ChromoPlate Bacterial Strain Kit (Sisältää 1 bakteerikannan, reagenssit, kontrollit ja muovit), kontrollit ja muovit)
5051S9 Aktivointientsyymit (suunniteltu Ames-testiä varten)
Mikrolevyversio perinteisestä Ames-testistä. Muta-ChromoPlateTM Kit on herkkä ja käyttäjäystävällinen. Sitä käytetään yleisesti yksittäisten kemikaalien tai kemikaaliseosten mutageenisen potentiaalin havaitsemiseen vedestä, jätevedestä, sedimentistä, ilman vesiuutteista, uusista kemikaaleista, elintarvikkeista, kosmetiikasta, lääkkeistä ja mistä tahansa muusta materiaalista, joka voidaan laittaa vesiliuokseen tai mikrosuspensioon siten, että testikanta voi ottaa sen vastaan.
6041 Ames-384 ISO Basic Kit (Sisältää 1 bakteerin, reagenssit, kontrollit ja muovit)
6041-2BS Ames-384 ISO Bacterial Strain Kit (Sisältää 1 bakteerikannan, reagenssit, kontrollit ja muovit)
6041-2BS Ames-384 ISO Bacterial Strain Kit (Sisältää 1 bakteerikannan, reagenssit ja muovit, kontrollit ja muovit)
Ames ISO Basic Kit on tunnetun ”Ames-testin” vaihtelumittausversio, jossa käytetään 48 kuopan näytealtistusmuotoa 384 kuopan mikrolevyllä reagenssin ja muovin käytön vähentämiseksi. Ames ISO -menetelmä on kehitetty mutageenisten materiaalien testaamiseen erilaisista lähteistä, kuten ympäristöstä otetuista ilma- ja vesinäytteistä, elintarvikkeista, henkilökohtaisen hygienian tuotteista ja teollisuusjätevesistä, vaihtelumäärityksellä, joka on muunnelma perinteisestä ”Ames-testistä”.
Ames ISO -menetelmä tarjoaa tutkijoille luotettavan testimenetelmän, joka on helppo asentaa ja suorittaa, joka soveltuu näytteille, jotka ovat vesiliuoksessa tai suspensiossa, ja joka tuottaa helposti havaittavissa olevan kolorimetrisen päätepisteen, joka on saavutettu 2-3 päivää kestäneen inkubaation jälkeen, jonka jälkeen näytettä on inkuboitu 37 °C:ssa.
5041 Ames Modified ISO Basic Kit (Sisältää 1 bakteerin, reagenssit, kontrollit ja muovit)
5041-2BS Ames Modified ISO Bacterial Strain Kit (Sisältää 2 bakteereihin liittyvää reagenssia, kontrollit ja muovit)
Tämä Ames-testausmenetelmä on modifikaatio Amesin ISO-fluktuointimäärityksestä. Bakteerikannat altistetaan ennalta mutageenisten yhdisteiden eri pitoisuuksille suspensiossa olevan kasvualustan kanssa 100 minuutin ajan. Kukin laimennus tehdään kolmena kappaleena.
Näytteet siirretään sen jälkeen, sekoitetaan reversioliuokseen ja istutetaan 96-kuoppalevylle käyttäen samalla 48-kuoppalevyn arviointimuotoa. Näytteitä inkuboidaan 2-3 päivää ja revertanttipesäkkeiden määrä (yksittäiset kuopat) lasketaan kolorimetrisesti.
Mikä Ames-testi sopii parhaiten tutkimukseeni
Muta-ChromoPlate Ames-testi
- Ideaalinen ympäristönäytteiden välittömään arviointiin
- Oppilaitosten opetuskäyttöön luokkahuoneprojekteja varten (helppo tehdä valmiiksi)
- 96-kuoppamuodossa 96-kuoppalevyillä. Useampi päätepiste/näyte voi parantaa merkitsevyyttä
- Bakteerien altistuminen tapahtuu koko määrityksen ajan
- Erittäin käyttäjäystävällinen, ja tulosten saamiseksi tarvitaan vain vähän vaiheita
- Erinomainen haihtuvien aineiden testaamiseen
- Esikonsentrointivaiheita ei tarvita, käytetään suuria näytemääriä
- herkemmät tulokset verrattuna levyjen sisällyttämismäärityksiin
ISO- ja modifioidut ISO Ames -testit
- Ideaalinen farmaseuttisten aineiden ja uusien molekyylien löytämiseen
- 48 kuoppien formaatti 96- tai 384-kuoppalevyissä vähentää tulosten kehittämiseen tarvittavia levyjä
- KORKEAN LÄHTÖTULOKSENMENETELMÄ! Useita näytteitä tai laimennustasoja voidaan testata nopeasti
- Tarvitaan pienempiä näytekokoja
- Bakteeripitoisuus tarkistetaan optisen tiheyden avulla (varmistaa log-kasvuvaiheen)
- Vähentää muovien ja reagenssien tarvetta, vähemmän hävittämistä
- Määritys on yksinkertaista ja testin pisteytys on nopeaa ja helppoa
- Määritys on herkempi kuin levy-inkorporaatiomääritys
- Hyödyntää pre-altistusjaksoa bakteerien hyväksikäytön tehostamiseksi
- Vakiintuneempi altistuskonsentraatio auxotrofisten kasvuvaiheiden aikana
Ames-testisarjat
EBPI tarjoaa laajan valikoiman Ames-testimenetelmiä tutkimus- ja kehitystyöhön, ympäristönäytteenottoa ja lääkekehitysprojekteja varten.
|
Muta-ChromoPlate Kit |
Ames ISO Test 384 Well Format |
Modified Ames ISO Test |
