Leucocite normale

Cele cinci categorii majore de leucocite la mamifere sunt neutrofilele, eozinofilele, bazofilele, limfocitele și monocitele. Primele trei colectiv se numesc granulocite, deoarece conțin granule în citoplasmă, iar ultimele două colectiv se numesc celule mononucleare cu referire la nucleele lor rotunde. Acești termeni colectivi sunt oarecum înșelători, deoarece unele granulocite au granule abia perceptibile, iar majoritatea monocitelor nu au nuclee rotunde. Granulocitele de la majoritatea mamiferelor sunt clasificate ca neutrofile, eozinofile și bazofile pe baza reacției granulelor lor specifice cu coloranții din colorațiile policrome ale sângelui, numite colorații Romanowsky.

Specia prototip pentru clasificarea granulocitelor sunt oamenii, la care granulele neutrofile sunt mici și roz, cu afinitate slabă pentru complexele azurii, granulele bazofile sunt violet închis din cauza afinității puternice pentru complexele azurii, iar eozinofilele sunt intens portocalii din cauza legăturii puternice a eozinei. Clasificarea granulocitelor din speciile animale se bazează în parte pe omologia aspectului cu granulocitele umane și în parte pe demonstrarea omologiei conținutului și funcției enzimatice.

Există multe diferențe, unele subtile și altele evidente, între specii și în cadrul speciilor.

Nutreofile mature

Sinonime: Celulă polimorfonucleară (PMN), neutrofile segmentate

Nutreofilul segmentat, sau heterofilul la păsări, reptile și unele mamifere, este granulocitul predominant. La multe specii este leucocita predominantă în stare de sănătate. În stare de sănătate, de obicei, doar neutrofilele mature sunt eliberate din măduvă pentru a circula în sânge. Deoarece neutrofilele mature din sângele uman prototipic au nucleul segmentat în lobi de cromatină condensată conectată prin filamente, neutrofilele mature sunt numite neutrofile segmentate („segs” sau „neuts”). Neutrofilele mature ale multor specii de animale nu au o dispunere distinctă a lobilor și a filamentelor (au nuclee constrânse sau contururi nucleare neregulate/nobile), cu toate acestea, ele sunt numite, de asemenea, neutrofile segmentate. Neutrofilele fac parte din sistemul imunitar înnăscut și reprezintă prima linie de apărare (și sunt esențiale pentru) împotriva agenților patogeni bacterieni. Neutrofilele au un timp de înjumătățire scurt – ele persistă doar 10-15 ore după ce au fost eliberate în sângele periferic (Carakostas et al. 1981). Atunci când analizăm sângele, eșantionăm doar fondul de neutrofile circulante și nu fondul marginal sau de rezervă din măduvă. La majoritatea speciilor, cu excepția pisicilor, raportul dintre rezerva circulantă și rezerva marginală este de 1:1 (Carakostas et al. 1981) (este estimat la 3:1 la cai). Eliberarea neutrofilelor din rezerva de marginalizare are loc ca răspuns la corticosteroizi (endogeni sau exogeni), care reduc moleculele de adeziune responsabile de marginalizare (sau patrularea endoteliului prin rularea mediată de selectină) și are potențialul de a dubla numărul de neutrofile mature (așa-numita „leucogramă de stres”).

Neutrofile imature

La unele animale, neutrofilele imature pot fi observate în sângele periferic, iar prezența lor se numește deplasare spre stânga. Prezența unui număr crescut de neutrofile imature (adică peste intervalul de referință stabilit pentru specia respectivă) indică, de obicei, un răspuns la citokine inflamatorii și o leucogramă inflamatorie. Cel mai frecvent tip de neutrofile imature observate în sânge este neutrofilul în bandă, care este cu un stadiu mai puțin matur decât un neutrofil segmentat. Neutrofilele în bandă se disting de neutrofilele mature prin forma nucleului lor, căruia îi lipsește segmentarea clară (un segment este definit ca o constricție >50% în lățimea nucleului) și conturul neregulat al neutrofilei mature. În anumite situații, se eliberează stadii anterioare benzilor (de exemplu, metamilocitele; a se vedea mai jos). O deplasare spre stânga este de obicei (dar nu întotdeauna) însoțită de o schimbare toxică (schimbarea toxică poate să nu fie observată dacă există o ușoară deplasare spre stânga sau dacă există doar eliberarea de celule imature din măduvă fără o maturare accelerată). Cu toate acestea, neutrofilele imature pot fi, de asemenea, eliberate prematur în afecțiuni ale măduvei osoase, cum ar fi leucemia sau leziuni grave ale măduvei osoase (neutrofilele imature nu sunt de obicei toxice nici în acest context).

Nutrofilele imature sunt clasificate pe baza stadiului lor de maturare. Cel mai timpuriu precursor specific neutrofil identificabil este un mielocit, care se diferențiază într-un metamiocit, apoi într-un neutrofil în bandă și, în cele din urmă, într-un neutrofil matur segmentat. Numai mielocitul este capabil de diviziune – toate etapele mai mature (metamiocite, bandă, neutrofile segmentate) sunt incapabile de diviziune (post-mitotice). Principalul criteriu de diferențiere a neutrofilelor imature între ele este forma nucleului lor, care începe să se adâncească sau să se restrângă pe măsură ce celula se maturizează. Un mielocit are un nucleu rotund, un metamelocit are un nucleu indentat sau în formă de bob de rinichi, iar o bandă are un nucleu în formă de potcoavă de cal sau cu laturile paralele (pentru o imagine compilată a neutrofilelor imature, vă rugăm să consultați paginile de schimbare la stânga sau de schimbare toxică). Este important să se facă distincția între neutrofile imature și monocite, în special la câine, unde aceste celule pot semăna între ele (a se vedea monocite mai jos). Acest lucru se realizează prin observarea tuturor caracteristicilor celulei (cromatina nucleară, forma nucleară, localizarea nucleară în celulă, culoarea citoplasmei, marginile citoplasmatice, prezența sau absența vacuolelor și a granulelor) în mod concertat (a se vedea imaginea din dreapta).

Când efectuăm o numărătoare celulară diferențială, clasificăm neutrofilele în categoria „segmentate” dacă nucleul are regiuni care sunt distinct constrânse (mai mult de 50% din lățimea nucleului) sau prezintă proeminențe laterale care au ca rezultat margini nucleare neregulate. O celulă ale cărei margini nucleare sunt netede și paralele (sau aproape paralele) este un neutrofil „în bandă” și ar trebui să fie numărat ca atare. Stadiile mai imature sunt clasificate în funcție de forma nucleară, așa cum s-a descris mai sus. Rețineți că celulele aflate între aceste stadii bine definite vor fi întotdeauna observate în sânge. În aceste circumstanțe, celula în cauză va fi plasată în categoria mai matură, adică o celulă cu caracteristici nucleare la jumătatea distanței dintre o bandă și un neutrofil segmentat va fi numită neutrofil segmentat. Neutrofilele mai imature pot fi numărate separat în categoriile lor specifice sau grupate împreună ca neutrofile de „bandă”. La Universitatea Cornell, toate neutrofilele imature (neutrofile în bandă, metamiocite și mielocite) sunt grupate în categoria „bandă” a numărătorii noastre diferențiale de celule. Folosind imaginea de mai sus ca exemplu, celulele de la B la D ar fi numărate ca „benzi” și doar celula A ar fi numărată ca neutrofile „segmentate”. Cu toate acestea, dacă observăm stadii care sunt mai puțin mature decât un neutrofil de bandă (metamiocite sau mielocite), furnizăm această informație în rezultate (de exemplu, deplasarea spre stânga se extinde la mielocite). Prezența acestor stadii mai imature indică, de obicei, o inflamație mai severă decât prezența doar a neutrofilelor în bandă.

Eozinofile

Granulele de eozinofile la majoritatea animalelor sunt portocalii, dar există întotdeauna excepții, în special la exotice. Granulele din eozinofilele iguanelor și ale unor păsări sunt de fapt albastru deschis. În general, nucleele eozinofilelor mature sunt mai scurte și mai puțin segmentate decât nucleele neutrofilelor, iar citoplasma, dacă este vizibilă, este albastru pal. Există o variație marcată între specii în ceea ce privește numărul, dimensiunea și forma granulelor eozinofile.

Cea mai mare variație intraspecie se găsește la eozinofilele de câine. Variația marcată în ceea ce privește dimensiunea, numărul și forma granulelor apare în interiorul și între indivizii din orice rasă. O variantă morfologică specifică și previzibilă a eozinofilei este întâlnită la Greyhounds, la alți sighthounds (de exemplu, Whippets, Deerhounds) și la unii Golden Retriever. Eozinofilele din aceste rase nu au granule vizibile și apar ca celule cu nuclee ușor segmentate, citoplasmă gri și vacuole. Ele sunt uneori confundate cu neutrofilele sau monocitele toxice și sunt numite eozinofile „vacuolate” sau „gri” (vezi imagini reprezentative ale acestor eozinofile în galeria de sânge de câine din albumul de hematologie). Pe analizorul de hematologie ADVIA, ele derapează în poarta monocitelor (conțin mai puțină peroxidază decât neutrofilele sau eozinofilele cu granulație normală).

Basofilele

Basofilele prototipice din sângele uman sunt pline de granule mici, rotunde, de culoare violet închis. Bazofile similare se găsesc la cai, camelide și rumegătoare. Aceste celule conțin mulți granule mici de culoare violet închis care ascund nucleul în multe celule. Unele bazofile au puțini granule, ceea ce este probabil rezultatul degranulării în probă. Un număr redus de bazofile se găsește în mod obișnuit în sângele bovinelor și cailor sănătoși, dar mai puțin în cel al camelidelor.

Basofilele canine sunt dificil de recunoscut, deoarece multe dintre ele nu au granule ușor de observat. Acest lucru se datorează faptului că granulele sunt de culoarea lavandei palide față de violet. Trăsăturile majore de identificare a bazofilelor canine sunt nucleul lung și pliat, descris ca fiind „ca o panglică”, și nuanța neobișnuită de gri spre lavanda a citoplasmei. Unele bazofile conțin câțiva granule mov deschis evidente (granulele sunt mai ușor de observat în celulele care sunt rupte). Basofilele sunt rare în sângele câinilor sănătoși. Bazofilele feline sunt împachetate cu granule mici, ușor ovale, care sunt mai degrabă de culoarea lavandei palide decât violet închis. La multe dintre ele, nucleul pare să aibă vacuole, care sunt de fapt granule așezate deasupra cromatinei. Basofilele sunt rare în sângele pisicilor sănătoase.

Limfocite

Majoritatea limfocitelor care circulă la câinii sănătoși, pisici, camelide și cai sunt celule mici (mature) care au nuclee rotunde cu cromatină netedă, densă și o mică margine de citoplasmă albastru deschis. Cromatina este atât de densă deoarece este în cea mai mare parte heterocromatină (celula nu transcrie activ ADN). Limfocitele trebuie deosebite de globulele roșii nucleate (a se vedea mai jos). Unele limfocite din toate speciile pot avea cantități crescute de citoplasmă de culoare albastru foarte deschis până la incoloră. Acestea nu sunt numite reactive, ci sunt considerate doar „variante” normale. Unele limfocite sunt ușor mai mari și au un model de cromatină mai fin și mai liber. Limfocitele care se găsesc în sângele rumegătoarelor normale au un aspect destul de variabil. Multe sunt limfocite intermediare, cu cromatină slab aglomerată și citoplasmă destul de abundentă. Nu toate limfocitele din frotiurile de sânge sunt rotunde. Unele sunt distorsionate în alte forme de forțele mecanice care li se aplică în timpul frotiului, iar altele sunt modelate prin contactul cu globulele roșii. În general, dimensionăm limfocitele în funcție de dimensiunea nucleului lor în raport cu neutrofilele (care au aceeași dimensiune la toate speciile), așa cum se arată în tabelul de mai jos. De asemenea, limfocitele normale trebuie diferențiate de globulele roșii nucleate, de limfocitele reactive și de celulele neoplazice (care pot fi mieloide sau limfoide). Mai multe informații în acest sens sunt oferite mai jos.

Dimensiunea limfocitelor

Dimensiunea limfocitelor	Dimensiunea nucleului în raport cu cea a unui neutrofil
Mici	Nucleul limfocitelor poate încăpea în interiorul unui neutrofil
Intermediar	Nucleul limfocitului are aceeași dimensiune ca și cel al unui neutrofil
Large	Neutrofilul poate încăpea în interiorul nucleului.

Alte limfocite care pot fi observate în sânge sunt:

• Limfocitele „reactive” sunt asociate cu un răspuns imunitar. Ele pot varia ca mărime (de la mici la mari), dar au cromatina grupată (heterocromatină) și, de obicei, cantități crescute de citoplasmă de culoare albastru mai închis care este destul de netedă. Unele pot avea vacuole citoplasmatice clare. Este important să se diferențieze limfocitele mari reactive de „blastele” asociate cu o leucemie (a se vedea mai jos). Folosim o varietate de tehnici pentru a le diferenția, inclusiv caracteristicile citologice, constatările clinice și restul rezultatelor hemogramei. Limfocitele reactive pot fi observate la orice animal, dar sunt destul de frecvente în sângele animalelor tinere, în special al celor care au fost recent vaccinate.
• Limfocite granulare: Acestea se găsesc, de asemenea, în număr redus la animalele sănătoase (cuprind între 1-10% din toate limfocitele). Limfocitele granulare se disting prin prezența unor mici granule roșii adunate într-o zonă a citoplasmei, de obicei în interiorul unei adâncituri a nucleului. Limfocitele granulare sunt fie celule T citotoxice, fie celule natural killer. Un număr crescut de limfocite granulare poate fi observat în condiții reactive (de exemplu, infecția cu Ehrlichia canis la câini, boala renală cronică la câini) sau ca parte a unei leucemii primare (leucemie a limfocitelor granulare).

Limfocite vs. globule roșii nucleate

NRBC în stadii foarte târzii, cum ar fi metarubriculul, se disting de limfocite prin citoplasma lor policromatofilă și nucleii picnotici. Stadiile mai timpurii, cum ar fi rubricitul bazofilic, deși mai problematice, au o citoplasmă de un albastru mai intens și un model de cromatină mai grosier condensat în comparație cu limfocitele.

Se poate lua în considerare și contextul general al frotiului; de exemplu, ar fi de așteptat ca nRBC-urile să însoțească o policromie marcată (răspuns regenerativ). Acest lucru nu este valabil la camelide și pisici, unde nRBC sunt frecvent observate în sânge în diverse situații, nu numai în anemiile regenerative.

Limfocite reactive versus blaste

Este important să se facă distincția între celulele hematopoietice reactive mari și cele neoplazice („blaste”). Acestea din urmă nu se întâlnesc la animalele normale, ci numai la animalele cu neoplazie hematopoietică (leucemie acută, limfom cu fază leucemică sau rareori în sindromul mielodisplazic). Rețineți că diferențierea limfocitelor reactive de „blastele” leucemice poate fi foarte dificilă la animalele cu un număr redus de celule problematice, așa-numitele celule „big blue”. Prezența celulelor neoplazice indică o leucemie, în timp ce limfocitele reactive indică o stimulare antigenică (semnificații foarte diferite). Motivul pentru care numim celulele „blaste” este acela că nu putem determina în mod concludent linia lor genetică prin caracteristicile lor morfologice; sunt necesare alte instrumente, cum ar fi imunofenotipul și colorarea citochimică. Pentru mai multe informații despre modul în care facem distincția între aceste două tipuri foarte diferite de leucocite din sânge (reactive sau neoplazice), consultați pagina celulei „mari și albastre”.

Monocite

Monocitele sunt leucocitele care sunt cele mai problematice pentru identificare, deoarece pot fi destul de variabile în ceea ce privește dimensiunea și aspectul. Ele sunt adesea mai mari decât neutrofilele și sunt de obicei cel mai mare leucocite, dar nu există diferențe consistente între specii. Nucleul poate fi rotund, în formă de rinichi sau pseudo-lobulat (poate imita un neutrofil). Uneori poate fi chiar în formă de bandă, în special la câini, și poate fi confundat cu neutrofilele în bandă. Cu toate acestea, cromatina monocitelor este mai puțin densă decât cea a neutrofilelor și este descrisă ca fiind dantelată sau ușor aglomerată. Citoplasma este de obicei netedă și albastru-cenușiu și poate conține câteva vacuole de dimensiuni variabile și, ocazional, câteva granule roșii-roșii foarte fine. Unele, cum ar fi monocitele ecvine, seamănă cu limfocitele. Textura citoplasmei unui monocit este ușor granuloasă sau grosieră în comparație cu citoplasma limfocitelor, care este foarte netedă și sticloasă.

Legături conexe

• Interpretarea modificărilor numărului de leucocite individuale și a prezenței în sânge a leucocitelor anormale, de exemplu mastocite, histiocite.
• Modele leucocitare: Leucocitoza fiziologică, leucograma de stres, leucograma inflamatorie, leucemia
• Caracteristici morfologice ale nRBC și interpretarea numărului crescut în sânge.
• Caracteristici morfologice ale neutrofilelor imature
• Caracteristici morfologice ale modificărilor toxice ale neutrofilelor.
• Ghid de testare rapidă: Ghid rapid de interpretare a modificărilor în rezultatele testelor hematologice
• Atlas: Pentru compilații de imagini.