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A coloração de Gram, o procedimento de coloração mais utilizado em bacteriologia, é um procedimento de coloração complexa e diferencial. Através de uma série de etapas de coloração e descoloração, os organismos do Domínio Bactérias são diferenciados de acordo com a composição da parede celular. As bactérias Gram-positivas possuem paredes celulares que contêm espessas camadas de peptidoglicano (90% da parede celular). Estas manchas são púrpura. As bactérias Gram-negativas possuem paredes com camadas finas de peptidoglicano (10% da parede), e alto conteúdo lipídico. Estas manchas são rosa. Este procedimento de coloração não é usado para Archeae ou Eukaryotes, pois ambos não possuem peptidoglicano. O desempenho da coloração de Gram em qualquer amostra requer quatro etapas básicas que incluem a aplicação de uma coloração primária (violeta cristal) a um esfregaço fixado por calor, seguido pela adição de um mordente (Iodo de Gram), descoloração rápida com álcool, acetona, ou uma mistura de álcool e acetona e, por último, a coloração com safranina.
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