Leucócitos normais

As cinco categorias principais de leucócitos em mamíferos são neutrófilos, eosinófilos, basófilos, linfócitos e monócitos. Os três primeiros coletivamente são chamados granulócitos, pois contêm grânulos em seu citoplasma, e os dois últimos coletivamente são chamados células mononucleares em referência aos seus núcleos redondos. Estes termos colectivos são um pouco enganadores, uma vez que alguns granulócitos têm grânulos pouco perceptíveis e a maioria dos monócitos não tem núcleos redondos. Os granulócitos da maioria dos mamíferos são classificados como neutrófilos, eosinófilos e basófilos, com base na reação de seus grânulos específicos com os corantes em manchas de sangue policromado, chamadas manchas de Romanowsky.

As espécies protótipo para classificação dos granulócitos são humanas, nas quais os grânulos de neutrófilos são pequenos e rosados com fraca afinidade para complexos azuis, os grânulos de basófilos são roxos profundos devido à forte afinidade para os complexos azuis, e os eosinófilos são intensamente alaranjados devido à forte ligação da eosina. A classificação dos granulócitos nas espécies animais é baseada em parte na homologia da aparência aos granulócitos humanos e em parte na demonstração da homologia do conteúdo enzimático e função.

Existem muitas diferenças, algumas sutis e algumas óbvias, entre as espécies e dentro das espécies.

Nutrófilos maduros

Sinônimos: Polimorfonucleares (PMN), neutrófilos segmentados

Os neutrófilos segmentados, ou os heterófilos em aves, répteis e alguns mamíferos, são o granulócito predominante. Em muitas espécies é o leucócito predominante na saúde. Na saúde, geralmente apenas os neutrófilos maduros são liberados da medula para circular no sangue. Como os neutrófilos maduros no sangue humano prototípico têm núcleos que são segmentados em lóbulos de cromatina condensada ligados por filamentos, os neutrófilos maduros são chamados neutrófilos segmentados (“segs” ou “neutros”). Os neutrófilos maduros de muitas espécies animais não têm um arranjo de lóbulos e filamentos distintos (eles têm núcleos apertados ou contornos nucleares irregulares/desenhosos), no entanto, eles também são chamados de neutrófilos segmentados. Os neutrófilos fazem parte do sistema imunológico inato e são a primeira linha de (e são essenciais para) defesa contra patógenos bacterianos. Os neutrófilos têm uma meia-vida curta – eles só persistem por 10-15 horas depois de serem liberados no sangue periférico (Carakostas et al 1981). Ao analisarmos o sangue, estamos apenas a recolher amostras do pool de neutrófilos circulantes e não do pool marginal ou de reserva na medula. Na maioria das espécies, além dos gatos, a razão entre o pool circulante e o marginal é de 1:1 (Carakostas et al 1981) (é estimado em 3:1 em cavalos). A liberação de neutrófilos do pool de marginais ocorre em resposta aos corticosteróides (endógenos ou exógenos), que desregulam as moléculas de adesão responsáveis pela marginação (ou patrulhamento do endotélio através de laminação mediada por selectina) e tem o potencial de dobrar a contagem de neutrófilos maduros (o chamado “leucograma de estresse”).

Neutrófilos imaturos

Em alguns animais, os neutrófilos imaturos podem ser vistos no sangue periférico e sua presença é chamada de deslocamento para a esquerda. A presença de números aumentados de neutrófilos imaturos (isto é, acima do intervalo de referência estabelecido para aquela espécie) normalmente indica uma resposta a citocinas inflamatórias e a um leucograma inflamatório. O tipo mais comum de neutrófilos imaturos visto no sangue é o neutrófilo da banda neutrofílica, que é um estágio menos maduro que um neutrófilo segmentado. Os neutrófilos de banda distinguem-se dos neutrófilos maduros pela forma do seu núcleo, que carece da segmentação clara (um segmento é definido como uma constrição >50% na largura do núcleo) e contorno irregular do neutrófilo maduro. Em algumas situações, são liberados estágios anteriores às bandas (por exemplo, metamielócitos; veja abaixo). Um turno esquerdo é normalmente (mas nem sempre) acompanhado por uma mudança tóxica (a mudança tóxica pode não ser vista se houver um turno esquerdo leve ou se houver apenas libertação de células imaturas da medula sem maturação acelerada). Entretanto, os neutrófilos imaturos também podem ser liberados prematuramente em distúrbios da medula óssea, como leucemia ou lesão grave da medula óssea (em geral, os neutrófilos imaturos também não são tóxicos nesse cenário).

Neutrófilos imaturos são classificados com base no seu estágio de maturação. O precursor de neutrófilos específico identificável mais cedo é um mielócito, que se diferencia em um metamielócito, depois um neutrófilo de banda e finalmente um neutrófilo maduro segmentado. Apenas o mielócito é capaz de divisão – todos os estágios mais maduros (metamielócito, banda, neutrófilos segmentados) são incapazes de divisão (pós-mitócitos). O critério primário para diferenciar os neutrófilos imaturos uns dos outros é a forma do seu núcleo, que começa a se indentar ou a estreitar à medida que a célula amadurece. Um mielócito tem um núcleo redondo, um metamielócito tem um núcleo indentado ou em forma de feijão e uma banda tem um núcleo em forma de ferradura ou de lado paralelo (para uma imagem compilada de neutrófilos imaturos, consulte as páginas de deslocamento à esquerda ou de mudança tóxica). É importante distinguir entre neutrófilos imaturos e monócitos, particularmente no cão onde estas células podem assemelhar-se umas às outras (ver monócito abaixo). Isto é conseguido observando todas as características da célula (cromatina nuclear, forma nuclear, localização nuclear na célula, cor do citoplasma, bordas citoplasmáticas, presença ou ausência de vacúolos e grânulos) em conjunto (ver imagem à direita).

Ao realizar uma contagem diferencial de células, classificamos os neutrófilos na categoria “segmentados” se o núcleo tiver regiões distintas (mais de 50% da largura do núcleo) ou se apresentar protuberâncias laterais resultando em margens nucleares irregulares. Uma célula cujas margens nucleares são lisas e paralelas (ou quase paralelas) é um neutrófilo de “banda” e deve ser contada como tal. Os estágios mais imaturos são classificados pela sua forma nuclear, como descrito acima. Note que as células entre estes estágios bem definidos serão sempre vistas em sangue. Sob estas circunstâncias, a célula em questão será colocada na categoria mais madura, ou seja, uma célula com características nucleares a meio caminho entre uma banda e um neutrófilo segmentado será chamada de neutrófilo segmentado. Os neutrófilos mais imaturos podem ser contados separadamente como suas categorias específicas ou agrupados como neutrófilos de “banda”. Na Universidade Cornell, todos os neutrófilos imaturos (neutrófilos de banda, metamielócitos e mielócitos) são agrupados na categoria “banda” da nossa contagem diferencial de células. Usando a imagem acima como exemplo, as células B até D seriam contadas como “bandas” e apenas a célula A seria contada como um neutrófilo “segmentado”. No entanto, se observarmos estágios que são menos maduros que um neutrófilo de banda (metamielócitos ou mielócitos), fornecemos esta informação nos resultados (por exemplo, o turno esquerdo estende-se aos mielócitos). A presença destes estágios mais imaturos geralmente indica inflamação mais severa do que a presença de neutrófilos de banda sozinhos.

Eosinófilos

Granulos de eosinófilos na maioria dos animais são laranjas mas há sempre exceções, particularmente nos exoticos. Os grânulos em eosinófilos de iguanas e algumas aves são na verdade azul pálido. Em geral, os núcleos dos eosinófilos maduros são mais curtos e menos segmentados do que os núcleos dos neutrófilos e o citoplasma, se visível, é azul pálido. Existe variação de espécies marcadas em relação ao número, tamanho e forma dos grânulos dos eosinófilos.

A maior variação intra-espécie é encontrada nos eosinófilos de cães. A variação marcada no tamanho, número e forma dos grânulos ocorre dentro e entre indivíduos de qualquer raça. Uma variante morfológica específica e previsível do eosinófilos é vista em Greyhounds, outros sighthounds (por exemplo, Whippets, Deerhounds) e em alguns Golden Retrievers. Os eosinófilos nestas raças não possuem grânulos visíveis e aparecem como células com núcleos ligeiramente segmentados, citoplasma cinzento e vacúolos. Por vezes são confundidos com neutrófilos ou monócitos tóxicos e são chamados eosinófilos “vacuolados” ou “cinzentos” (ver imagens representativas destes eosinófilos na galeria de sangue do cão sob o álbum de hematologia). No analisador hematológico ADVIA, eles derivam para a porta do monócito (contêm menos peroxidase que neutrófilos ou eosinófilos normais granulados).

Basófilos

Basófilos protótipos de sangue humano são preenchidos com pequenos grânulos roxos escuros e redondos. Basófilos similares são encontrados em cavalos, camelídeos e ruminantes. Estas células contêm muitos pequenos grânulos púrpura profundos que obscurecem o núcleo em muitas células. Alguns basófilos têm poucos grânulos, o que provavelmente é o resultado da desgranulação na amostra. Baixos números de basófilos são comumente encontrados em sangue de bovinos e cavalos saudáveis, mas menos de camelídeos.

Basófilos caninos são difíceis de reconhecer já que muitos não possuem grânulos facilmente aparentes. Isto é porque os grânulos são uma lavanda pálida versus roxa. As principais características de identificação dos basófilos caninos são o núcleo longo e dobrado, descrito como “tipo fita”, e o invulgar matiz cinzento a lavanda do citoplasma. Alguns basófilos contêm alguns grânulos púrpura claros óbvios (os grânulos são mais fáceis de ver nas células que estão rompidas). Os basófilos são raros no sangue de cães saudáveis. Os basófilos felinos são embalados com pequenos grânulos ligeiramente ovais que são de lavanda pálida em vez de púrpura profunda. O núcleo em muitos parece ter vacúolos, que na verdade são grânulos deitados em cima da cromatina. Os basófilos são raros no sangue de gatos saudáveis.

Linfócitos

Maior parte dos linfócitos que circulam em cães saudáveis, Gatos, camelídeos e cavalos são pequenas células (maduras) que têm núcleos redondos com cromatina lisa e densa e uma pequena borda de citoplasma azul claro. A cromatina é tão densa porque é principalmente heterocromatina (a célula não está transcrevendo ativamente o DNA). Os linfócitos devem ser distinguidos dos glóbulos vermelhos nucleados (ver abaixo). Alguns linfócitos em todas as espécies podem ter quantidades aumentadas de azul muito claro a citoplasma incolor. Estes não são chamados de reactivos, mas apenas considerados como “variantes” normais. Alguns linfócitos são ligeiramente maiores e têm um padrão de cromatina mais fino e mais solto. Os linfócitos encontrados no sangue de ruminantes normais são bastante variáveis na aparência. Muitos são linfócitos intermediários com cromatina frouxamente aglomerada e citoplasma bastante abundante. Nem todos os linfócitos nos esfregaços de sangue são redondos. Alguns são distorcidos em outras formas pelas forças mecânicas aplicadas a eles durante a baciloscopia e alguns são moldados pelo contato com os eritrócitos. Geralmente dimensionamos os linfócitos pelo seu tamanho nuclear em relação aos neutrófilos (que são do mesmo tamanho em todas as espécies), como mostra a tabela abaixo. Além disso, os linfócitos normais precisam ser diferenciados dos glóbulos vermelhos nucleados, linfócitos reativos e células neoplásicas (que podem ser mielóides ou linfóides). Mais informação sobre isto é dada abaixo.

Tamanho dos linfócitos

Tamanho dos linfócitos	Tamanho dos núcleos em relação a um neutrofilo
Pequeno	Núcleo de linfócitos pode caber dentro de um neutrofilo
Intermediário	Núcleo de linfócitos tem o mesmo tamanho que um neutrofilo
Grande	Neutrofilo pode caber dentro do núcleo.

Outros linfócitos que podem ser vistos no sangue são:

• Linfócitos “reactivos” estão associados a uma resposta imunitária. Eles podem variar de tamanho (pequenos a grandes), mas têm cromatina (heterocromatina) aglomerada e geralmente quantidades aumentadas de citoplasma azul mais profundo que é bastante suave. Alguns podem ter vacúolos citoplásmicos claros. É importante diferenciar os grandes linfócitos reactivos dos “explosivos” associados a uma leucemia (ver abaixo). Usamos uma variedade de técnicas para distinguir entre elas, incluindo características citológicas, achados clínicos e o resto dos resultados do hemograma. Linfócitos reativos podem ser vistos em qualquer animal, mas são bastante comuns no sangue de animais jovens, especialmente os que foram recentemente vacinados.
• Linfócitos granulares: Estes também são encontrados em baixo número em animais saudáveis (compreendem entre 1-10% de todos os linfócitos). Os linfócitos granulares são distinguidos pela presença de pequenos grânulos vermelhos recolhidos numa área do citoplasma, geralmente dentro de uma reentrância do núcleo. Os linfócitos granulares são células T citotóxicas ou células naturais assassinas. O aumento do número de linfócitos granulares pode ser visto em condições reativas (por exemplo, infecção por Ehrlichia canis em cães, doença renal crônica em cães) ou como parte de uma leucemia primária (leucemia de linfócitos granulares).

Linfócitos vs glóbulos vermelhos nucleados

Muitas nRBCs em fase tardia, como a metarubrícea, distinguem-se dos linfócitos pelos seus citoplasmas policromatofílicos e núcleos piqunóticos. Estágios iniciais, como o rubricado basofílico, embora mais problemáticos, têm um citoplasma azul mais profundo e um padrão de cromatina mais grosseiramente condensado em comparação com o linfócito.

O contexto geral do esfregaço também pode ser considerado; por exemplo, espera-se que as nRBCs acompanhem a policromasia marcada (resposta regenerativa). Isto não é verdade para camelídeos e gatos, onde nRBCs são freqüentemente vistas no sangue em várias situações, não apenas anemias regenerativas.

Linfócitos reativos versus blastos

É importante distinguir grandes células reativas de células hematopoiéticas neoplásicas (“blastos”). Estas últimas não são vistas em animais normais, mas apenas em animais com neoplasia hematopoiética (leucemia aguda, linfoma com fase leucêmica ou raramente na síndrome mielodisplásica). Note que diferenciar linfócitos reativos de “explosões” leucêmicas pode ser muito difícil em animais com baixo número de células problemáticas, as chamadas “grandes células azuis”. A presença de células neoplásicas indica uma leucemia, enquanto os linfócitos reactivos indicam uma estimulação antigénica (significados muito diferentes). A razão pela qual chamamos as células de “explosões” é porque não podemos determinar conclusivamente a sua linhagem pelas suas características morfológicas; Outras ferramentas, como a imunofenotipagem e a coloração citoquímica são necessárias. Para mais informações sobre como distinguir entre estes dois tipos muito diferentes de leucócitos no sangue (reativos ou neoplásicos), consulte a página de células “big blue”.

Monócitos

Monócitos são os leucócitos mais problemáticos para identificação, pois podem ser bastante variáveis em tamanho e aparência. São frequentemente maiores que os neutrófilos e são geralmente os maiores leucócitos, mas não há diferenças consistentes entre as espécies. O núcleo pode ser redondo a pseudo-lobulado (pode imitar um neutrófilo). Pode até ocasionalmente ser em forma de banda, especialmente em cães, e pode ser confundido com neutrófilos de banda. No entanto, a cromatina dos monócitos é menos densa que os neutrófilos, e é descrita como rendas a ligeiramente aglomeradas. O citoplasma é geralmente liso e cinza-azulado e pode conter alguns buracos de tamanho variável e, ocasionalmente, alguns grânulos vermelhos-rosados muito finos. Alguns, como o monócito equino, assemelham-se a linfócitos. A textura do citoplasma num monócito é ligeiramente granulosa ou grosseira em comparação com o citoplasma de linfócitos, que é muito liso e vítreo.

Ligações relacionadas

• Interpretação de alterações no número de leucócitos individuais e presença de leucócitos anormais no sangue, por exemplo, mastócitos, histiócitos.
• Padrões de leucócitos: Leucocitose fisiológica, leucograma de estresse, leucograma inflamatório, leucemia
• Características morfológicas de nRBC e interpretação de aumento do número de leucócitos no sangue.
• Características morfológicas de neutrófilos imaturos
• Características morfológicas de alteração tóxica de neutrófilos.
• Guia de teste rápido: Guia rápido para interpretação das alterações nos resultados dos testes hematológicos
• Atlas: Para compilações de imagens.