Normale Leukozyten

Die fünf Hauptkategorien von Leukozyten bei Säugetieren sind Neutrophile, Eosinophile, Basophile, Lymphozyten und Monozyten. Die ersten drei werden als Granulozyten bezeichnet, weil sie Granula in ihrem Zytoplasma enthalten, und die beiden letztgenannten als mononukleäre Zellen, weil sie runde Zellkerne haben. Diese Sammelbezeichnungen sind etwas irreführend, da einige Granulozyten kaum wahrnehmbare Granula haben und die meisten Monozyten keine runden Zellkerne besitzen. Die Granulozyten der meisten Säugetiere werden als neutrophil, eosinophil und basophil klassifiziert, basierend auf der Reaktion ihrer spezifischen Granula mit den Farbstoffen in polychromen Blutfärbungen, den Romanowsky-Färbungen.

Der Prototyp für die Klassifizierung der Granulozyten ist der Mensch, bei dem die Granula der Neutrophilen klein und rosa sind und eine schwache Affinität zu den Azurkomplexen aufweisen, die Granula der Basophilen sind aufgrund ihrer starken Affinität zu den Azurkomplexen tiefviolett und die Eosinophilen sind aufgrund der starken Bindung von Eosin intensiv orange. Die Klassifizierung von Granulozyten bei Tierarten basiert zum Teil auf der Homologie des Aussehens mit menschlichen Granulozyten und zum Teil auf dem Nachweis der Homologie des Enzymgehalts und der Funktion.

Es gibt viele Unterschiede, einige subtil und einige offensichtlich, zwischen den Arten und innerhalb der Arten.

Reife Neutrophile

Synonyme: Polymorphonukleare Zelle (PMN), segmentierte Neutrophile

Die segmentierten Neutrophilen oder Heterophilen bei Vögeln, Reptilien und einigen Säugetieren sind die vorherrschenden Granulozyten. Bei vielen Arten ist er der vorherrschende Leukozyt im gesunden Zustand. Im gesunden Zustand werden normalerweise nur reife Neutrophile aus dem Knochenmark freigesetzt und zirkulieren im Blut. Da reife neutrophile Granulozyten im prototypischen menschlichen Blut Kerne haben, die in Lappen aus kondensiertem Chromatin segmentiert sind, die durch Filamente verbunden sind, werden reife neutrophile Granulozyten als segmentierte Neutrophile („segs“ oder „neuts“) bezeichnet. Die reifen Neutrophilen vieler Tierarten haben keine ausgeprägte Lappen- und Filamentanordnung (sie haben verengte Kerne oder unregelmäßige/knubbelige Kernumrisse), dennoch werden auch sie als segmentierte Neutrophile bezeichnet. Neutrophile sind Teil des angeborenen Immunsystems und bilden die erste Verteidigungslinie gegen bakterielle Krankheitserreger (und sind dafür unerlässlich). Neutrophile haben eine kurze Halbwertszeit – sie verbleiben nur 10-15 Stunden, nachdem sie in das periphere Blut abgegeben wurden (Carakostas et al. 1981). Bei der Analyse von Blut wird nur der zirkulierende Neutrophilen-Pool untersucht, nicht aber der marginale oder Reserve-Pool im Knochenmark. Bei den meisten Tierarten, mit Ausnahme von Katzen, beträgt das Verhältnis zwischen zirkulierendem und randständigem Pool 1:1 (Carakostas et al. 1981) (bei Pferden wird es auf 3:1 geschätzt). Die Freisetzung von Neutrophilen aus dem Marginalisierungspool erfolgt als Reaktion auf (endogene oder exogene) Kortikosteroide, die die für die Marginalisierung verantwortlichen Adhäsionsmoleküle (oder das Patrouillieren des Endothels durch Selectin-vermitteltes Rollen) herunterregulieren und das Potenzial haben, die Anzahl der reifen Neutrophilen zu verdoppeln (sogenanntes „Stressleukogramm“).

Unreife neutrophile Granulozyten

Bei einigen Tieren können unreife neutrophile Granulozyten im peripheren Blut nachgewiesen werden; ihr Vorhandensein wird als Linksverschiebung bezeichnet. Das Vorhandensein einer erhöhten Anzahl unreifer neutrophiler Granulozyten (d. h. über dem für die betreffende Tierart festgelegten Referenzintervall) weist in der Regel auf eine Reaktion auf entzündliche Zytokine und ein entzündliches Leukogramm hin. Der häufigste Typ unreifer Neutrophiler im Blut ist der Bandneutrophile, der eine Stufe weniger reif ist als ein segmentierter Neutrophiler. Bandneutrophile Neutrophile unterscheiden sich von reifen Neutrophilen durch die Form ihres Zellkerns, dem die klare Segmentierung (ein Segment ist definiert als eine >50%ige Einschnürung in der Breite des Zellkerns) und die unregelmäßige Kontur des reifen Neutrophilen fehlt. In manchen Situationen werden auch Stadien vor den Banden freigesetzt (z. B. Metamyelozyten; siehe unten). Eine Linksverschiebung geht in der Regel (aber nicht immer) mit toxischen Veränderungen einher (toxische Veränderungen sind möglicherweise nicht zu sehen, wenn es sich um eine leichte Linksverschiebung handelt oder wenn nur unreife Zellen aus dem Knochenmark freigesetzt werden, ohne dass es zu einer beschleunigten Reifung kommt). Unreife Neutrophile können jedoch auch bei Knochenmarkserkrankungen wie Leukämie oder schweren Knochenmarksverletzungen vorzeitig freigesetzt werden (auch in diesem Fall sind unreife Neutrophile in der Regel nicht toxisch).

Reife Neutrophile werden nach ihrem Reifestadium klassifiziert. Der früheste identifizierbare spezifische Neutrophilenvorläufer ist ein Myelozyt, der sich in einen Metamyelozyten, dann in einen Bandneutrophilen und schließlich in einen reifen segmentierten Neutrophilen differenziert. Nur der Myelozyt ist teilungsfähig – alle reiferen Stadien (Metamyelozyt, Bandneutrophiler, segmentierter Neutrophiler) sind nicht teilungsfähig (postmitotisch). Das wichtigste Unterscheidungskriterium für unreife Neutrophile ist die Form des Zellkerns, der sich bei der Reifung der Zelle eindellt oder verengt. Ein Myelozyt hat einen runden Kern, ein Metamyelozyt hat einen eingedellten oder nierenförmigen Kern und ein Band hat einen hufeisenförmigen oder parallelseitigen Kern (eine zusammengestellte Abbildung unreifer Neutrophiler finden Sie auf den Seiten Linksverschiebung oder Giftwechsel). Es ist wichtig, zwischen unreifen Neutrophilen und Monozyten zu unterscheiden, insbesondere beim Hund, wo diese Zellen einander ähneln können (siehe Monozyten unten). Dies wird erreicht, indem man alle Merkmale der Zelle (Kernchromatin, Kernform, Lage des Kerns in der Zelle, Farbe des Zytoplasmas, Zytoplasmaränder, Vorhandensein oder Fehlen von Vakuolen und Granula) gemeinsam betrachtet (siehe Bild rechts).

Bei der differenzierten Zellzählung ordnen wir Neutrophile in die Kategorie „segmentiert“ ein, wenn der Kern Bereiche aufweist, die deutlich verengt sind (mehr als 50 % der Kernbreite) oder seitliche Vorsprünge haben, die zu unregelmäßigen Kernrändern führen. Eine Zelle, deren Kernränder glatt und parallel (oder fast parallel) sind, ist ein „Band“-Neutrophil und sollte als solches gezählt werden. Unreifere Stadien werden, wie oben beschrieben, nach ihrer Kernform klassifiziert. Es ist zu beachten, dass Zellen zwischen diesen klar definierten Stadien immer im Blut zu finden sein werden. Unter diesen Umständen wird die betreffende Zelle in die reifere Kategorie eingeordnet, d. h. eine Zelle mit Kernmerkmalen auf halbem Weg zwischen einem bandförmigen und einem segmentierten Neutrophilen wird als segmentierter Neutrophiler bezeichnet. Unreifere Neutrophile können separat als ihre spezifischen Kategorien gezählt oder als „Band“-Neutrophile zusammengefasst werden. An der Cornell University werden alle unreifen Neutrophilen (Bandneutrophile, Metamyelozyten und Myelozyten) in der „Band“-Kategorie unserer differenzierten Zellzählung zusammengefasst. Im obigen Beispiel würden die Zellen B bis D als „Banden“ gezählt, und nur Zelle A würde als „segmentierte“ Neutrophile gezählt werden. Wenn wir jedoch Stadien beobachten, die weniger reif sind als ein Bandneutrophil (Metamyelozyt oder Myelozyt), geben wir diese Information in den Ergebnissen an (z. B. erstreckt sich die Linksverschiebung auf Myelozyten). Das Vorhandensein dieser unreiferen Stadien deutet in der Regel auf eine schwerere Entzündung hin als das Vorhandensein von Bandneutrophilen allein.

Eosinophile

Eosinophile Granula sind bei den meisten Tieren orange, aber es gibt immer Ausnahmen, insbesondere bei Exoten. Die Granula in den Eosinophilen von Leguanen und einigen Vögeln sind sogar blassblau. Im Allgemeinen sind die Kerne reifer Eosinophiler kürzer und weniger segmentiert als die Kerne von Neutrophilen, und das Zytoplasma ist, sofern sichtbar, blassblau. Hinsichtlich der Anzahl, Größe und Form der eosinophilen Granula gibt es deutliche Unterschiede zwischen den Arten.

Die größten Unterschiede zwischen den Arten finden sich bei den Hunde-Eosinophilen. Deutliche Variationen in Größe, Anzahl und Form der Granula treten innerhalb und zwischen Individuen jeder Rasse auf. Eine spezifische und vorhersehbare morphologische Variante der Eosinophilen findet sich bei Windhunden, anderen Windhunden (z. B. Whippets, Deerhounds) und bei einigen Golden Retrievern. Eosinophile dieser Rassen haben keine sichtbaren Granula und erscheinen als Zellen mit leicht segmentierten Kernen, grauem Zytoplasma und Vakuolen. Sie werden manchmal mit toxischen Neutrophilen oder Monozyten verwechselt und als „vakuolierte“ oder „graue“ Eosinophile bezeichnet (siehe repräsentative Bilder dieser Eosinophilen in der Hundeblut-Galerie im Album Hämatologie). Auf dem ADVIA-Hämatologie-Analysegerät driften sie in den Monozytenbereich ab (sie enthalten weniger Peroxidase als Neutrophile oder normal granulierte Eosinophile).

Basophile

Prototypische Basophile des menschlichen Blutes sind mit kleinen, runden, dunkelvioletten Granula gefüllt. Ähnliche Basophile finden sich bei Pferden, Kameliden und Wiederkäuern. Diese Zellen enthalten viele kleine dunkelviolette Körnchen, die bei vielen Zellen den Zellkern verdecken. Einige Basophile haben nur wenige Granula, was wahrscheinlich auf eine Degranulation in der Probe zurückzuführen ist. Eine geringe Anzahl von Basophilen findet sich häufig im Blut von gesunden Rindern und Pferden, weniger jedoch bei Kameliden.

Hundebasophile sind schwer zu erkennen, da viele von ihnen keine sichtbaren Granula aufweisen. Das liegt daran, dass die Granula eher blass lavendelfarben als violett sind. Die wichtigsten Erkennungsmerkmale von Hundebasophilen sind der lange und gefaltete Zellkern, der als „bandartig“ beschrieben wird, und die ungewöhnliche graue bis lavendelfarbene Färbung des Zytoplasmas. Einige Basophile enthalten einige deutliche hellviolette Körnchen (Körnchen sind leichter zu sehen, wenn die Zellen zerbrochen sind). Basophile sind im Blut von gesunden Hunden selten. Katzenbasophile sind vollgepackt mit kleinen, leicht ovalen Granula, die eher blass lavendelfarben als dunkelviolett sind. Bei vielen scheint der Zellkern Vakuolen aufzuweisen, bei denen es sich in Wirklichkeit um Granula handelt, die auf dem Chromatin liegen. Basophile sind im Blut von gesunden Katzen selten.

Lymphozyten

Die meisten der Lymphozyten, die bei gesunden Hunden, Katzen, Kameliden und Pferden zirkulieren, sind kleine (reife) Zellen mit runden Kernen, glattem, dichtem Chromatin und einem kleinen Rand aus hellblauem Zytoplasma. Das Chromatin ist so dicht, weil es sich größtenteils um Heterochromatin handelt (die Zelle schreibt die DNA nicht aktiv um). Lymphozyten müssen von kernhaltigen roten Blutkörperchen unterschieden werden (siehe unten). Einige Lymphozyten aller Arten können erhöhte Mengen an sehr hellblauem bis farblosem Zytoplasma aufweisen. Diese werden nicht als reaktiv bezeichnet, sondern einfach als normale „Varianten“ betrachtet. Einige Lymphozyten sind etwas größer und haben ein feineres, lockereres Chromatinmuster. Die im Blut normaler Wiederkäuer vorkommenden Lymphozyten haben ein recht unterschiedliches Aussehen. Viele sind intermediäre Lymphozyten mit locker verklumptem Chromatin und ziemlich reichlich Zytoplasma. Nicht alle Lymphozyten in Blutausstrichen sind rund. Einige werden durch die mechanischen Kräfte, die während des Ausstrichs auf sie einwirken, in andere Formen verformt, und einige werden durch den Kontakt mit roten Blutkörperchen verformt. Die Größe der Lymphozyten wird im Allgemeinen anhand ihrer Kerngröße im Verhältnis zu den Neutrophilen (die bei allen Arten gleich groß sind) bestimmt (siehe Tabelle unten). Außerdem müssen normale Lymphozyten von kernhaltigen roten Blutkörperchen, reaktiven Lymphozyten und neoplastischen Zellen (die myeloisch oder lymphoid sein können) unterschieden werden. Weitere Informationen hierzu finden Sie weiter unten.

Größe der Lymphozyten

Lymphozytengröße	Kerngröße im Verhältnis zu einem Neutrophilen
Klein	Kern eines Lymphozyten passt in einen Neutrophilen
Mittelgroß	Der Kern des Lymphozyten ist genauso groß wie der eines Neutrophilen
Groß	Der Neutrophile kann in den Kern passen.

Andere Lymphozyten, die man im Blut sehen kann, sind:

• „Reaktive“ Lymphozyten sind mit einer Immunantwort verbunden. Sie können unterschiedlich groß sein (klein bis groß), haben jedoch verklumptes (Heterochromatin) Chromatin und in der Regel größere Mengen an tiefblauem, recht glattem Zytoplasma. Einige können klare zytoplasmatische Vakuolen aufweisen. Es ist wichtig, reaktive große Lymphozyten von „Blasten“ zu unterscheiden, die mit einer Leukämie assoziiert sind (siehe unten). Wir verwenden eine Reihe von Techniken, um sie zu unterscheiden, einschließlich zytologischer Merkmale, klinischer Befunde und der übrigen Ergebnisse des Blutbildes. Reaktive Lymphozyten können bei jedem Tier vorkommen, sind aber im Blut junger Tiere, insbesondere solcher, die kürzlich geimpft wurden, recht häufig.
• Granuläre Lymphozyten: Diese kommen auch bei gesunden Tieren in geringer Zahl vor (sie machen zwischen 1-10 % aller Lymphozyten aus). Granuläre Lymphozyten zeichnen sich durch das Vorhandensein kleiner roter Körnchen aus, die in einem Bereich des Zytoplasmas gesammelt sind, in der Regel innerhalb einer Einbuchtung des Zellkerns. Granuläre Lymphozyten sind entweder zytotoxische T-Zellen oder natürliche Killerzellen. Eine erhöhte Anzahl von granulären Lymphozyten kann bei reaktiven Zuständen (z. B. Ehrlichia canis-Infektion bei Hunden, chronische Nierenerkrankung bei Hunden) oder als Teil einer primären Leukämie (Leukämie der granulären Lymphozyten) auftreten.

Lymphozyten vs. kernhaltige Erythrozyten

Spätere Stadien der nRBC, wie z.B. der Metarubrikyt, unterscheiden sich von Lymphozyten durch ihr polychromatophiles Zytoplasma und pyknotische Kerne. Frühere Stadien, wie der basophile Rubricyt, stellen zwar ein größeres Problem dar, haben aber im Vergleich zum Lymphozyten ein tieferes blaues Zytoplasma und ein grob kondensiertes Chromatinmuster.

Der Gesamtkontext des Ausstrichs kann ebenfalls berücksichtigt werden; so würde man z. B. erwarten, dass nRBCs mit einer ausgeprägten Polychromasie einhergehen (regenerative Reaktion). Dies gilt nicht für Kameliden und Katzen, bei denen nRBC häufig in verschiedenen Situationen im Blut vorkommen, nicht nur bei regenerativen Anämien.

Reaktive Lymphozyten versus Blasten

Es ist wichtig, große reaktive von neoplastischen hämatopoetischen Zellen („Blasten“) zu unterscheiden. Letztere kommen bei normalen Tieren nicht vor, sondern nur bei Tieren mit hämatopoetischer Neoplasie (akute Leukämie, Lymphome mit leukämischer Phase oder selten beim myelodysplastischen Syndrom). Es ist zu beachten, dass die Unterscheidung zwischen reaktiven Lymphozyten und leukämischen „Blasten“ bei Tieren mit einer geringen Anzahl problematischer Zellen, den so genannten „großen blauen“ Zellen, sehr schwierig sein kann. Das Vorhandensein neoplastischer Zellen weist auf eine Leukämie hin, während reaktive Lymphozyten auf eine antigene Stimulation hinweisen (sehr unterschiedliche Bedeutungen). Wir bezeichnen die Zellen deshalb als „Blasten“, weil wir ihre Abstammung anhand ihrer morphologischen Merkmale nicht eindeutig bestimmen können; sind andere Instrumente wie Immunphänotypisierung und zytochemische Färbung erforderlich. Weitere Informationen zur Unterscheidung zwischen diesen beiden sehr unterschiedlichen Arten von Leukozyten im Blut (reaktiv oder neoplastisch) finden Sie auf der Seite über die „großen blauen“ Zellen.

Monozyten

Monozyten sind die Leukozyten, deren Identifizierung am problematischsten ist, da sie in Größe und Aussehen recht unterschiedlich sein können. Sie sind oft größer als Neutrophile und in der Regel der größte Leukozyt, aber es gibt keine einheitlichen Artenunterschiede. Der Zellkern kann rund, nierenförmig oder pseudo-lobulär sein (kann ein Neutrophil imitieren). Gelegentlich kann er sogar bandförmig sein, insbesondere bei Hunden, und kann mit bandförmigen Neutrophilen verwechselt werden. Das Chromatin von Monozyten ist jedoch weniger dicht als bei Neutrophilen und wird als spitzenförmig bis leicht verklumpt beschrieben. Das Zytoplasma ist in der Regel glatt und blau-grau und kann einige unterschiedlich große Vakuolen und gelegentlich einige sehr feine rosarote Granula enthalten. Einige, wie der Pferdemonozyt, ähneln Lymphozyten. Die Textur des Zytoplasmas eines Monozyten ist leicht körnig oder grob im Vergleich zum Zytoplasma von Lymphozyten, das sehr glatt und glasig ist.

Verwandte Links

• Interpretation von Veränderungen der Anzahl einzelner Leukozyten und Vorhandensein abnormaler Leukozyten im Blut, z. B. Mastzellen, Histiozyten.
• Leukozytenmuster: Physiologische Leukozytose, Stressleukogramm, entzündliches Leukogramm, Leukämie
• Morphologische Merkmale von nRBC und Interpretation erhöhter Zahlen im Blut.
• Morphologische Merkmale unreifer Neutrophiler
• Morphologische Merkmale toxischer Veränderungen bei Neutrophilen.
• Kurzanleitung: Kurzanleitung zur Interpretation von Veränderungen in hämatologischen Testergebnissen
• Atlas: Für Bildkompilationen.