Normale leukocyten

De vijf hoofdcategorieën leukocyten bij zoogdieren zijn neutrofielen, eosinofielen, basofielen, lymfocyten, en monocyten. De eerste drie worden gezamenlijk granulocyten genoemd, omdat zij korrels in hun cytoplasma bevatten, en de laatste twee worden gezamenlijk mononucleaire cellen genoemd in verband met hun ronde kernen. Deze collectieve termen zijn enigszins misleidend aangezien sommige granulocyten nauwelijks waarneembare granules hebben en de meeste monocyten geen ronde kernen hebben. Granulocyten van de meeste zoogdieren worden geclassificeerd als neutrofielen, eosinofielen en basofielen op basis van de reactie van hun specifieke korrels met de kleurstoffen in polychrome bloedkleuren, de zogenaamde Romanowsky-kleuringen.

De prototypesoorten voor granulocytenclassificatie zijn de mens, waarbij neutrofiele granules klein en roze zijn met een zwakke affiniteit voor azuurcomplexen, basofiele granules dieppaars zijn door een sterke affiniteit voor de azuurcomplexen, en eosinofielen intens oranje zijn door een sterke binding van eosine. Indeling van granulocyten bij diersoorten is deels gebaseerd op homologie van het uiterlijk met menselijke granulocyten en deels op het aantonen van homologie van enzyminhoud en functie.

Er zijn vele verschillen, sommige subtiel en sommige duidelijk, tussen soorten en binnen soorten.

Volwassen neutrofielen

Synoniemen: Polymorfonucleaire cel (PMN), gesegmenteerde neutrofielen

De gesegmenteerde neutrofiel, of de heterofiel bij vogels, reptielen en sommige zoogdieren, is de overheersende granulocyt. Bij veel soorten is het de overheersende leukocyt in gezondheid. In gezonde toestand komen gewoonlijk alleen rijpe neutrofielen vrij uit het merg om in het bloed te circuleren. Aangezien de rijpe neutrofielen in het prototypische menselijke bloed kernen hebben die gesegmenteerd zijn in lobben van gecondenseerd chromatine, verbonden door filamenten, worden de rijpe neutrofielen gesegmenteerde neutrofielen (“segs” of “neuts”) genoemd. De volgroeide neutrofielen van vele diersoorten hebben geen duidelijke indeling in lobben en filamenten (zij hebben wel ingesnoerde kernen of onregelmatige/knobbelige kernomtrekken), maar worden toch ook gesegmenteerde neutrofielen genoemd. Neutrofielen maken deel uit van het aangeboren immuunsysteem en vormen de eerste verdedigingslinie tegen (en zijn essentieel voor) bacteriële pathogenen. Neutrofielen hebben een korte halfwaardetijd – zij blijven slechts 10-15 uur aanwezig nadat zij in het perifere bloed zijn vrijgekomen (Carakostas et al 1981). Bij het analyseren van bloed, we zijn alleen het bemonsteren van de circulerende neutrofielen zwembad en niet de marginerende of reserve zwembad in het merg. Bij de meeste diersoorten, met uitzondering van katten, is de verhouding tussen circulerende en marginerende neutrofielen 1:1 (Carakostas et al 1981) (bij paarden wordt deze verhouding op 3:1 geschat). Het vrijkomen van neutrofielen uit de marginerende pool gebeurt in reactie op corticosteroïden (endogeen of exogeen), die adhesiemoleculen die verantwoordelijk zijn voor marginatie (of patrouilleren van het endotheel via selectin-gemedieerd rollen) downreguleren en het potentieel heeft om het aantal rijpe neutrofielen te verdubbelen (het zogenaamde “stress leukogram”).

Onrijpe neutrofielen

Bij sommige dieren kunnen in het perifere bloed onrijpe neutrofielen worden gezien en hun aanwezigheid wordt een linkverschuiving genoemd. De aanwezigheid van verhoogde aantallen onrijpe neutrofielen (d.w.z. boven het vastgestelde referentie-interval voor die soort) wijst gewoonlijk op een reactie op ontstekingsbevorderende cytokinen en op een ontstekingsleukogram. Het meest voorkomende type van onrijpe neutrofielen in bloed is de bandneutrofiel, die één stadium minder rijp is dan een gesegmenteerde neutrofiel. Bandneutrofielen onderscheiden zich van rijpe neutrofielen door de vorm van hun kern, die niet duidelijk gesegmenteerd is (een segment wordt gedefinieerd als een insnoering van >50% in de breedte van de kern) en een onregelmatige omtrek heeft, zoals de rijpe neutrofiel. In sommige situaties komen stadia vrij die vóór de banden liggen (b.v. metamyelocyten; zie hieronder). Een verschuiving naar links gaat gewoonlijk (maar niet altijd) gepaard met toxische verandering (toxische verandering wordt misschien niet gezien als er een milde verschuiving naar links is of als er alleen onrijpe cellen uit het merg vrijkomen zonder versnelde rijping). Onrijpe neutrofielen kunnen echter ook voortijdig vrijkomen bij beenmergaandoeningen, zoals leukemie of ernstig beenmergletsel (ook in deze setting zijn onrijpe neutrofielen meestal niet toxisch).

Immature neutrofielen worden ingedeeld op basis van hun stadium van rijping. De vroegst identificeerbare specifieke neutrofiele precursor is een myelocyt, die differentieert in een metamyelocyt, vervolgens in een bandneutrofiel, en tenslotte in een volgroeide gesegmenteerde neutrofiel. Alleen de myelocyt is in staat zich te delen – alle rijpere stadia (metamyelocyt, bandneutrofiel, gesegmenteerde neutrofiel) zijn niet in staat zich te delen (post-mitotisch). Het voornaamste criterium om onrijpe neutrofielen van elkaar te onderscheiden is de vorm van hun kern, die begint in te krimpen of te vernauwen naarmate de cel rijper wordt. Een myelocyt heeft een ronde kern, een metamyelocyt heeft een ingedeukte of niervormige kern en een band heeft een hoefijzervormige of parallel-zijdige kern (voor een gecompileerde afbeelding van onrijpe neutrofielen, zie de pagina’s over de linkse verschuiving of giftige verandering). Het is belangrijk onderscheid te maken tussen onrijpe neutrofielen en monocyten, vooral bij de hond waar deze cellen op elkaar kunnen lijken (zie monocyt hieronder). Dit wordt bereikt door alle kenmerken van de cel (kernchromatine, kernvorm, plaats van de kern in de cel, kleur van het cytoplasma, cytoplasmatische randen, aan- of afwezigheid van vacuolen en korrels) in samenhang te bekijken (zie afbeelding rechts).

Bij het uitvoeren van een differentiële celtelling classificeren we neutrofielen in de “gesegmenteerde” categorie als de kern regio’s heeft die duidelijk ingesnoerd zijn (meer dan 50% van de breedte van de kern) of laterale uitsteeksels heeft die resulteren in onregelmatige kernranden. Een cel waarvan de kernranden glad en evenwijdig (of bijna evenwijdig) zijn, is een “band”-neutrofiel en moet als zodanig worden geteld. Meer onrijpe stadia worden ingedeeld aan de hand van hun kernvorm, zoals hierboven beschreven. Er zij op gewezen dat cellen tussen deze welomschreven stadia altijd in het bloed zullen worden gezien. In dat geval wordt de cel in kwestie in de rijpere categorie ingedeeld, d.w.z. een cel met kernkenmerken halverwege tussen een band en een gesegmenteerde neutrofiel wordt een gesegmenteerde neutrofiel genoemd. Meer onrijpe neutrofielen kunnen afzonderlijk worden geteld als hun specifieke categorieën of kunnen worden gegroepeerd als “band “neutrofielen. Aan de Cornell University worden alle onrijpe neutrofielen (bandneutrofielen, metamyelocyten en myelocyten) gegroepeerd in de “band”-categorie van onze differentiële celtelling. Als we de bovenstaande afbeelding als voorbeeld nemen, zouden de cellen B tot en met D worden geteld als “banden” en zou alleen cel A worden geteld als een “gesegmenteerde” neutrofiel. Als we echter stadia waarnemen die minder rijp zijn dan een bandneutrofiel (metamyelocyt of myelocyt), geven we deze informatie in de resultaten (bv. de linkse verschuiving strekt zich uit tot myelocyten). De aanwezigheid van deze meer onvolwassen stadia wijst gewoonlijk op een ernstiger ontsteking dan de aanwezigheid van bandneutrofielen alleen.

Eosinofielen

Eosinofiele granula zijn bij de meeste dieren oranje, maar er zijn altijd uitzonderingen, vooral bij exoten. De granules in eosinofielen van leguanen en sommige vogels zijn in feite lichtblauw. In het algemeen zijn de kernen van rijpe eosinofielen korter en minder gesegmenteerd dan de kernen van neutrofielen en is het cytoplasma, indien zichtbaar, lichtblauw. Er bestaat een duidelijke soortsvariatie met betrekking tot het aantal, de grootte en de vorm van de eosinofiele granules.

De meeste intraspecifieke variatie wordt gevonden bij hondeneosinofielen. Markante variatie in korrelgrootte, -aantal en -vorm komt voor binnen en tussen individuen van elk ras. Een specifieke en voorspelbare morfologische variant van de eosinofiel wordt gezien bij Greyhounds, andere windhonden (bijv. Whippets, Deerhounds) en bij sommige Golden Retrievers. Eosinofielen in deze rassen missen zichtbare granules en verschijnen als cellen met licht gesegmenteerde kernen, grijs cytoplasma, en vacuolen. Ze worden soms verward met toxische neutrofielen of monocyten en worden “vacuole” of “grijze” eosinofielen genoemd (zie representatieve afbeeldingen van deze eosinofielen in de galerij van het hondenbloed onder het hematologie-album). Op de ADVIA hematologie-analysator drijven ze over in de monocytenpoort (bevatten minder peroxidase dan neutrofielen of normaal gekorrelde eosinofielen).

Basofielen

Prototypische basofielen van menselijk bloed zijn gevuld met kleine, ronde, donkerpaarse korrels. Vergelijkbare basofielen worden aangetroffen bij paarden, kameelachtigen en herkauwers. Deze cellen bevatten vele kleine dieppaarse granules die in veel cellen de kern aan het zicht onttrekken. Sommige basofielen hebben weinig korrels, wat waarschijnlijk het gevolg is van degranulatie in het monster. Lage aantallen basofielen worden algemeen aangetroffen in het bloed van gezonde runderen en paarden, maar minder in dat van kameelachtigen.

Basofielen bij de hond zijn moeilijk te herkennen, omdat veel basofielen geen duidelijk zichtbare korrels hebben. Dit komt omdat de korrels licht lavendelachtig zijn in plaats van paars. De belangrijkste kenmerken van basofielen bij de hond zijn de lange en geplooide kern, beschreven als “lintvormig”, en de ongewone grijze tot lavendelkleurige tint van het cytoplasma. Sommige basofielen bevatten enkele duidelijke lichtpaarse granules (granules zijn gemakkelijker te zien in cellen die gescheurd zijn). Basofielen zijn zeldzaam in het bloed van gezonde honden. Feline basofielen zitten vol met kleine, licht ovale korrels die eerder licht lavendelkleurig dan dieppaars zijn. Bij velen lijkt de kern vacuolen te vertonen, die eigenlijk granulen zijn die bovenop het chromatine liggen. Basofielen zijn zeldzaam in het bloed van gezonde katten.

Lymfocyten

De meeste lymfocyten die circuleren bij gezonde honden, katten, kameelachtigen en paarden zijn kleine (rijpe) cellen met ronde kernen met glad, dicht chromatine en een kleine rand lichtblauw cytoplasma. Het chromatine is zo dicht omdat het grotendeels heterochromatine is (de cel transcribeert het DNA niet actief). Lymfocyten moeten worden onderscheiden van gekernde rode bloedcellen (zie hieronder). Sommige lymfocyten van alle soorten kunnen verhoogde hoeveelheden zeer lichtblauw tot kleurloos cytoplasma hebben. Deze worden niet reactief genoemd, maar worden gewoon als normale “varianten” beschouwd. Sommige lymfocyten zijn iets groter en hebben een fijner, losser chromatinepatroon. De lymfocyten die in het bloed van normale herkauwers worden aangetroffen, zien er heel verschillend uit. Veel lymfocyten zijn intermediaire lymfocyten met losjes samengeklonterd chromatine en tamelijk overvloedig cytoplasma. Niet alle lymfocyten in bloeduitstrijkjes zijn rond. Sommige zijn vervormd tot andere vormen door de mechanische krachten die tijdens het uitstrijken op hen worden uitgeoefend en sommige zijn gevormd door contact met rode cellen. De grootte van lymfocyten wordt over het algemeen bepaald door hun kerngrootte in verhouding tot die van neutrofielen (die bij alle soorten even groot zijn), zoals blijkt uit de onderstaande tabel. Ook moeten normale lymfocyten worden onderscheiden van rode bloedcellen met een kern, reactieve lymfocyten en neoplastische cellen (die myeloïde of lymfoïde kunnen zijn). Meer informatie hierover wordt hieronder gegeven.

Grootte van lymfocyten

Lymfocytgrootte	Nucleusgrootte in verhouding tot een neutrofiel
Kleine	Nucleus van lymfocyt kan passen binnen een neutrofiel
Intermediair	Nucleus van lymfocyt is even groot als een neutrofiel
Groot	Neutrofiel kan binnen de nucleus passen.

Andere lymfocyten die in het bloed kunnen worden gezien zijn:

• “Reactieve” lymfocyten worden geassocieerd met een immuunrespons. Ze kunnen variëren in grootte (klein tot groot), maar hebben samengeklonterd (heterochromatine) chromatine en meestal grotere hoeveelheden dieper blauw cytoplasma dat vrij glad is. Sommige kunnen duidelijke cytoplasmatische vacuolen hebben. Het is belangrijk om reactieve grote lymfocyten te onderscheiden van “blasten” die bij een leukemie horen (zie hieronder). We gebruiken een aantal technieken om een onderscheid te maken, waaronder cytologische kenmerken, klinische bevindingen en de rest van de hemogramresultaten. Reactieve lymfocyten kunnen bij elk dier worden waargenomen, maar komen vrij vaak voor in het bloed van jonge dieren, vooral bij dieren die onlangs zijn gevaccineerd.
• Korrelige lymfocyten: Deze worden ook in geringe aantallen bij gezonde dieren aangetroffen (omvatten tussen 1-10% van alle lymfocyten). Granulaire lymfocyten onderscheiden zich door de aanwezigheid van kleine rode granula die in één gebied van het cytoplasma zijn verzameld, gewoonlijk binnen een inkeping van de kern. Granulaire lymfocyten zijn ofwel cytotoxische T-cellen ofwel natuurlijke killercellen. Verhoogde aantallen korrelige lymfocyten kunnen worden gezien bij reactieve aandoeningen (bijv. Ehrlichia canis infectie bij de hond, chronische nierziekte bij de hond) of als onderdeel van een primaire leukemie (leukemie van korrelige lymfocyten).

Lymfocyten versus gekernde rode bloedcellen

Zeer late stadia van nRBC’s, zoals de metarubricyte, onderscheiden zich van lymfocyten door hun polychromatofiele cytoplasma en pyknotische kernen. Eerdere stadia, zoals de basofiele rubricyt, vormen weliswaar een groter probleem, maar hebben een dieper blauw cytoplasma en een grover gecondenseerd chromatinepatroon in vergelijking met de lymfocyt.

De algemene context van het uitstrijkje kan ook worden meegewogen; zo zou men verwachten dat nRBC’s gepaard gaan met duidelijke polychromasie (regeneratieve respons). Dit is niet het geval bij kameelachtigen en katten, waar nRBC’s vaak worden gezien in het bloed in verschillende situaties, niet alleen regeneratieve anemieën.

Reactieve lymfocyten versus blasten

Het is belangrijk om grote reactieve van neoplastische hematopoietische cellen (“blasten”) te onderscheiden. Deze laatste worden niet gezien bij normale dieren, maar alleen bij dieren met hematopoietische neoplasie (acute leukemie, lymfoom met een leukemische fase of zelden bij myelodysplastisch syndroom). Merk op dat het zeer moeilijk kan zijn om reactieve lymfocyten te onderscheiden van leukemische “blasts” bij dieren met lage aantallen problematische cellen, de zogenaamde “grote blauwe” cellen. De aanwezigheid van neoplastische cellen wijst op een leukemie, terwijl reactieve lymfocyten wijzen op antigene stimulatie (zeer verschillende betekenissen). De reden waarom we de cellen “blasts” noemen, is dat we hun afstamming niet onomstotelijk kunnen vaststellen aan de hand van hun morfologische kenmerken; zijn andere hulpmiddelen nodig, zoals immunofenotypering en cytochemische kleuring. Voor meer informatie over het onderscheid tussen deze twee zeer verschillende soorten leukocyten in bloed (reactieve of neoplastische), zie de pagina over de “grote blauwe” cel.

Monocyten

Monocyten zijn de leukocyt die het meest problematisch is voor identificatie, omdat ze vrij variabel kunnen zijn in grootte en uiterlijk. Zij zijn vaak groter dan neutrofielen en zijn gewoonlijk de grootste leukocyt, maar er zijn geen consistente soortverschillen. De kern kan rond zijn, niervormig of pseudo-lobculair (kan op een neutrofiel lijken). Hij kan zelfs soms bandvormig zijn, vooral bij honden, en kan verward worden met bandneutrofielen. Het chromatine van monocyten is echter minder dicht dan dat van neutrofielen, en wordt beschreven als kantachtig tot licht samengeklonterd. Het cytoplasma is meestal glad en blauwgrijs en kan enkele vacuolen van variabele grootte bevatten, en soms enkele zeer fijne rozerode korrels. Sommige, zoals de paardenmonocyt, lijken op lymfocyten. De textuur van het cytoplasma in een monocyt is licht korrelig of ruw in vergelijking met het cytoplasma van een lymfocyt, dat zeer glad en glazig is.

Gerelateerde links

• Interpretatie van veranderingen in het aantal individuele leukocyten en de aanwezigheid van abnormale leukocyten in het bloed, b.v. mestcellen, histiocyten.
• Leukocytenpatronen: Fysiologische leukocytose, stressleukogram, ontstekingsleukogram, leukemie.
• Morfologische kenmerken van nRBC en interpretatie van verhoogde aantallen in bloed.
• Morfologische kenmerken van onrijpe neutrofielen.
• Morfologische kenmerken van toxische verandering in neutrofielen.
• Snelle testgids: Snelle gids voor interpretatie van veranderingen in hematologische testresultaten
• Atlas: Voor beeldcompilaties.