MGMT検査（膠芽腫） – histogenex.com

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メチル化O6-メチルグアニン-DNAメチルトランスフェラーゼ（MGMT）のコピー数は、リアルタイムメチル化特異ポリメラーゼ連鎖反応（MSP）によってベータアクチン（ACTB）のコピー数に対して測定されます。 そのために、腫瘍組織の内容は、手動マイクロダイセクションによって濃縮され、その後、DNA抽出が行われる。 DNAはPicogreenで定量され、メチル化されていないシトシンをウラシルに変換し、メチル化されたシトシンは変化しないようにするbisulfite処理で修飾される。 その後、Quantstudio 5 を用いてリアルタイム Methylation Specific PCR (MSP) を行い、MGMT と ACTB のコピー数を定量する(1)。 本手法は、amplifluor検出系を用いたリアルタイム検出によるPCRを行うものである。 8767>

Clinical Implication

MGMT はDNA修復酵素であり、ヒト癌ではしばしば過剰メチル化により不活性化されることが知られている。 MGMTの活性が低下すると、DNA損傷が適切に修復されず、癌が発生しやすくなる。 興味深いことに、このMGMT活性の欠如は、放射線療法やテモゾロミドなどの特定のアルキル化剤に対して腫瘍細胞をより感受性にする(2)。 国際的な予後予測第III相試験（RTOG 0525）において、MGMTアッセイは、テモゾロミドによる治療後に長生きし、無増悪期間が長くなる可能性が高い新規診断グリオブラストーマ患者を特定することに成功しました（3-5）。 最近、メチル化された患者と「グレーゾーン」患者の両方が、メチル化されていない患者よりも全生存期間において有意に良好な結果を示したという新しい発表がありました（6）。

検体要件

本測定に使用できる検体は、固定時間6～48時間のホルマリン固定、パラフィン包埋グリオーマ組織検体です。

容積

1つの代表パラフィンブロックが好ましい。 または、未染色の組織切片5枚（H&E染色用に5μm厚のスライド1枚、MGMT検査用に5～10μm厚のスライド4枚以上）が認められます。

保管および出荷上の注意

検体は常温で保管・出荷してください。

制限事項

検体によっては、ACTBコピー数が不足し、MGMTコピー数が検出限界以下であるために、無効な結果が得られることがあります。 多くはDNAの量や質が不十分であることが原因です。 MGMTやACTBのコピー数がLOD/LOQやカットオフ値付近で無効となったサンプルについては、バイサルファイト処理したDNAから再検査を行うことをお勧めします。

Special Requirements

なし

Turn-Around Time

スライドおよびパラフィンブロックはそれぞれ5～7営業日です。

  1. Vlassenbroeck I et al. Validation of Real-Time Methylation-Specific PCR to determine O6-Methylguanine-DNA Methyltransferase Gene Promotor Methylation in Glioma.（「神経膠腫におけるメチル化特異的リアルタイムPCR」の検証）（英語）。 J Mol Diagn. 2008 Jul;10(4):332-7
  2. Hegi ME et al. MGMT遺伝子サイレンシングと膠芽腫におけるテモゾロミドの有用性(英文). N Engl J Med 2005 Mar 10;352(10):997-1003.
  3. Gilbert MR et al. Dose-dense temozolomide for newly diagnosed glioblastoma: a randomized phase III clinical trial.7(7). J Clin Oncol. 2013 Nov 10;31(32):4085-91.
  4. Malmström A et al. 60歳以上の膠芽腫患者におけるテモゾロミド対標準6週間放射線療法対低分割放射線療法：北欧無作為化第3相試験.2013.11.10;31(32):4085-91.
  5. Temozolomide et al. Lancet Oncol 2012 Sep; 13(9): 916-926.
  6. Wick W et al. 高齢者の悪性星細胞腫に対するテモゾロミド化学療法単独 vs 放射線療法単独： NOA-08 ランダム化第 3 相試験.Lancet Oncol 2012 Sep; 13(9): 916-926.

    7. Wick W et al. Lancet Oncol 2012 Jul; 13(7): 707-715.

  7. Hegi ME et al. MGMT Promoter Methylation Cutoff with Safety Margin for Selecting Glioblastoma Patients into Trials Omitting Temozolomide.Lancet Oncol 2012 Jul; 13(7): 707-715. Hebegi ME et al. 4つの臨床試験のプール解析。 Clin Cancer Res 2019 Mar 15; 25(6): 1809-1816.

Updated on 23 May 2019

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