Vysvětlení screeningových a konfirmačních mezních hodnot
od Michelle Lach, MSIMC
Předběžné testování (tj. počáteční testování, screening), konfirmace a mezní hodnoty jsou některé ze složitostí testování drog, které mohou být často nepochopeny osobami mimo laboratorní prostředí. Abychom toto téma více osvětlili, chtěli jsme rozebrat jednotlivé kroky našeho testování a vysvětlit, jak odpovídají výsledkům, které zasíláme našim zákazníkům.
Na úvod je důležité pochopit rozdíl mezi třídami drog a drogami, včetně metabolitů drog. Třídy drog jsou zastřešující skupiny, do kterých jsou zařazeny jednotlivé drogy podobné povahy, a jsou tedy základem toho, jak jsou klasifikovány naše panely pro testování drog (tj. amfetaminy, kanabinoidy, opiáty atd.) (obrázek 1).
V rámci třídy drog existují drogy a jejich metabolity (vznikají při metabolizaci drogy v těle). Testujeme specifické drogy a/nebo metabolity drog, které jsou nejužitečnější při naznačování požití nebo expozice zneužívaným látkám. Například existuje mnoho různých látek, které spadají do třídy amfetaminových drog, ale my testujeme pouze amfetamin, MDA, MDEA, MDMA a metamfetamin (obrázek 2). Totéž platí pro kanabinoidy, přičemž do této třídy drog lze zařadit více než 100 jednotlivých sloučenin. Hlavní farmakologicky účinnou složkou rostliny konopí je tetrahydrokanabinol (THC), takže naše testování hledá pouze THC nebo metabolit drogy karboxy THC.
Počáteční testování a výsledky
Screening je proces odeslání všech vzorků přes vysoce citlivé přístrojové vybavení, které je rychlé a účinné pro určení, zda vzorek může obsahovat látky, které jsou předmětem zájmu. Screeningový proces kumulativně testuje mnoho sloučenin, které spadají do daných tříd drog. Třídy drog, které jsou předmětem screeningu, jsou určeny panely drog vybranými klientem pro testování.
Pokud vzorek projde screeningovým procesem a nic není zjištěno, naši certifikátoři negativních výsledků ověří negativní výsledky a je odeslána negativní zpráva. Proto mají negativní výsledky zpravidla rychlou dobu zpracování.
Proběhne-li vzorek screeningovým procesem a něco je zjištěno, znamená to, že se musíme blíže podívat, co to je, ale ještě to neznamená, že byl pozitivně testován na nějakou konkrétní drogu nebo metabolit drogy. Znamená to pouze, že vzorek nebyl negativní, když byl testován na mnoho různých sloučenin. V tomto okamžiku musí vzorek postoupit ke konfirmačnímu testování.
Konfirmační testování a výsledky
Jako akreditovaná forenzní toxikologická laboratoř jsme povinni potvrdit všechny výsledky, které vykážeme jako pozitivní. Pro provedení konfirmačního testování je další část z původního vzorku analyzována modernějším a specifičtějším přístrojem, ale tentokrát máme díky výsledkům screeningu představu o tom, co musíme hledat a jaké drogy vzít v úvahu. Konfirmační testování trvá déle než screening, protože přístroj hledá jednotlivé drogy a jejich metabolity. Potvrzení pozitivních výsledků může trvat až dalších 24-48 hodin po dokončení výsledků screeningu.
Cutoff Levels
Cutoff levels jsou detekční prahy pro sloučeniny, které jsou nastaveny na testovacím přístroji.
Použijeme-li příklad s kanabinoidy, naše screeningová cutoff úroveň pro třídu drog kanabinoidů ve vzorku vlasů je 1 pg/mg. Pokud by se některý ze stovek kanabinoidů kumulativně zaregistroval nad touto mezní hodnotou, vzorek by přešel do konfirmačního testování. Jak již bylo zmíněno, naše konfirmační přístroje hledají pouze jednu ze dvou specifických drog/metabolitů, které jsou předmětem zájmu, pokud jde o testování na požití nebo expozici konopí, a to karboxy THC (požití) a/nebo THC (expozice). Jakékoli jiné kanabinoidy, které mohly přispět k dosažení screeningových mezních hodnot, se při konfirmaci netestují, protože se v současné době nepovažují za relevantní pro zjišťování požití konopí nebo expozice.
Screeningové a konfirmační mezní hodnoty často způsobují zmatek, pokud jde o výsledky testování. Často se nás ptají, jak může běžný vlasový drogový test potvrdit pozitivitu karboxylátu THC při řekněme 0,15 pg/mg, když screeningová mezní hodnota je vysoko nad touto hranicí, tedy 1 pg/mg. Odpověď zní, že screeningový a konfirmační test jsou zcela odlišné testy, které používají jiné přístroje a zkoumají jiné věci. Screeningové hraniční hodnoty bylo dosaženo při testování více kanabinoidů, které byly registrovány nad hraniční hodnotou screeningového testu (1 pg/mg). Když se vzorek dostal do samostatného konfirmačního testu (zcela odlišný test od začátku do konce), měřil se pouze karboxy THC s odlišnou mezní hodnotou (0,05 pg/mg). To znamená, že ze všech kanabinoidů, které byly ve vzorku zaznamenány, bylo ve vzorku pouze 0,15 pg/mg karboxy THC.
Při použití příkladu konopí specifického pro testování vlasů je důležité si uvědomit, že máme dva odlišné testy pro detekci THC ve vzorku vlasů. Ačkoli screeningový proces obou testů je stejný, postupy přípravy testu a potvrzení se liší. Obrázky 3-6 znázorňují rozdíly v detekci THC mezi oběma testy.
Vlasový drogový test: Tento drogový test se nejčastěji používá při testování dospělých na užívání (požití) konopí. Potvrzovací přístroj pro tento test hledá karboxy THC, metabolit drogy THC. Přítomnost karboxy THC svědčí o požití, protože se nachází pouze v případě, že tělo THC metabolizovalo.
Test expozice vlasů (ChildGuard®): Vlasy mají porézní povrch, takže látky z prostředí na nich mají tendenci ulpívat, což umožňuje testování expozice. Tento test se nejčastěji používá u nezletilých osob nebo osob pod zákonným dohledem, pokud se předpokládá, že jejich prostředí je nebezpečné z důvodu expozice látkám. Jedná se o testování na požití a expozici, a proto se při konfirmačním testu hledá jak karboxy THC, tak THC. Jedná se o speciální test, protože na rozdíl od běžného testu na drogy ve vlasech expoziční test vykáže potvrzený pozitivní výsledek, pokud je ve vzorku přítomno THC nebo karboxy THC, případně obojí. Jedná se o jediný vlasový drogový test, který dokáže testovat pasivní expozici drogám bez nutnosti požití. Je výhodný pro dárce, kteří jsou vystaveni škodlivému prostředí, ale sami látky požít mohou, ale nemusí, i když k náhodnému požití může dojít. Dárci, kteří mají tendenci často strkat ruce do úst (mladší, vývojově postižení atd.), mohou náhodně pozřít zbytky látek ze svého okolí.
Obrázek 3 znázorňuje screeningový test vzorku vlasů na požití kanabinoidů. Je vidět, že ve vzorku je zjištěno množství kanabinoidů, které by mohly vést k tomu, že by test potřeboval bližší zkoumání s konfirmačním testováním. Kumulativní hladina zjištěných kanabinoidních sloučenin (THC, karboxy, ostatní) by přispěla k dosažení hraniční hodnoty pro screening (1 pg/mg). Pokud detekovatelné množství sloučenin ve vzorku klesne pod hraniční úroveň pro screening, vzorek bude přezkoumán a ověřen certifikačním vědeckým pracovníkem s negativním výsledkem a vykázán jako negativní.
Obrázek 4 znázorňuje potvrzovací test na požití, který by následoval po screeningovém testu z příkladu vzorku na obrázku 3, pokud by detekovatelné množství sloučenin ve třídě kanabinoidních drog překročilo screeningovou mezní hodnotu 1 pg/mg. Jelikož se jedná o konfirmační test na požití, bude zjišťovat pouze specifické hladiny karboxy THC. Pokud hladiny překročí konfirmační mezní hladinu karboxy THC (0,05 pg/mg), výsledky budou přezkoumány a ověřeny certifikačním vědeckým pracovníkem pro pozitivní výsledky a poté vykázány jako potvrzené pozitivní výsledky. Pokud hladiny karboxy THC nepřekročí konfirmační mezní hodnoty, výsledky přezkoumá a ověří negativní certifikující vědecký pracovník a výsledky budou oznámeny jako negativní.
Obrázek 5 je podobný obrázku 3, ale znázorňuje screening vzorku, který by naznačoval expozici prostředí, nikoli požití. I když chybí karboxy THC, THC a další kanabinoidy by přispěly ke kumulativním hladinám ve vzorku.
Obrázek 6 znázorňuje konfirmační test, který by následoval po screeningovém testu na expozici THC pro vzorek uvedený na obrázku 5. Opět si všimněte, že ve vzorku chybí karboxy THC, což je způsobeno tím, že THC nebyl dárcem metabolizován, což obecně znamená expozici prostředí. Potvrzovací test na environmentální expozici by rovněž odhalil karboxy THC, pokud je přítomen.
Techniky screeningu a potvrzení, stejně jako mezní hodnoty, se mohou u jednotlivých vzorků lišit. Doufáme, že lepší pochopení významu těchto prvků a jejich funkcí v oblasti testování drog může pomoci rozšířit celkové znalosti o tom, jak lze využít různé testy vzorků a panely drog k získání nejlepších výsledků.
Michelle Lachová, šéfredaktorka časopisu Substance/NeoTox a marketingová manažerka společnosti USDTL, pracuje v oboru testování drog již více než pět let, aby pomohla veřejnosti lépe porozumět pokročilým službám v oblasti testování drog, aby bylo možné využívat správné testy a nejlepší výsledky.