Odhaduje se, že 90 % všech karcinogenů jsou zároveň mutageny. Amesův test, původně vyvinutý Dr. Brucem Amesem a jeho kolegy, využívá modifikované bakterie citlivé na mutagenní látky k posouzení schopnosti sloučenin způsobovat přímé mutace DNA. Reverzní mutace způsobí, že se bakterie vrátí do protrofního stavu a rostou na médiu s nedostatkem vybraných živin. Tento test se nazývá Salmonella Ames Salmonella/microsome mutagenicity assay (Salmonella test; Amesův test), byl použit k potvrzení mutagenních mechanismů u několika známých karcinogenů a použit k odhalení nových, dosud neznámých karcinogenů ve spotřebitelských výrobcích. Úřad pro kontrolu potravin a léčiv (FDA) nyní používá Amesův test k rychlému a levnému screeningu mnoha chemických látek. Těch několik chemických látek, které se na základě Amesova testu jeví jako mutagenní, se dále testuje na zvířatech, aby se posoudila jejich karcinogenní účinnost.
Pro použití v Amesově testu bylo vyvinuto mnoho různých testovacích kmenů složených jak ze Salmonella typhimurium, tak z Escherichia coli, které detekují specifické typy mutací, jako jsou párování bází nebo posun rámců, a jsou citlivější na konkrétní látky. Vylepšení testu zvýšila citlivost kmenů na vstup sloučenin, zavedla defektní mechanismy opravy DNA a poskytla schopnost metabolické bioaktivace. Původní metoda zalévacích destiček byla také z velké části nahrazena novější metodou fluktuačního testu, která využívá expozici kapalině, inkubaci a reverzní krok a k prokázání růstu bakterií používá kolorimetrický indikátor pH. Tato vylepšení společně vedla ke snížení detekčních limitů, zvětšení rozsahu sloučenin, které lze detekovat, umožnila vysoce výkonné úpravy a učinila test biologicky relevantnější pro člověka. Společnost EBPI nabízí mnoho různých možností testů pro každou ze tří níže popsaných metod soupravy, aby zajistila úspěch vaší mutační analýzy.
Základní souprava Muta-ChromoPlate™
5051 Základní souprava Muta-ChromoPlate (Obsahuje 1 bakterii, činidla, kontroly a plasty)
B5051 Souprava Muta-ChromoPlate Bacterial Strain Kit (Obsahuje 2 bakteriální činidla, kontroly a plasty)
5051S9 Aktivační enzymy (určeno pro Amesův test)
Mikrotitulková verze tradičního „pour plate“ Amesova testu. Sada Muta-ChromoPlateTM Kit je citlivá a uživatelsky přívětivá. Běžně se používá ke zjišťování mutagenního potenciálu jednotlivých chemických látek nebo směsí chemických látek ve vodě, odpadních vodách, sedimentech, vzdušných vodných extraktech, nových chemických látkách, potravinách, kosmetice, léčivých přípravcích a jakémkoli jiném materiálu, který lze umístit do vodného roztoku nebo mikrosuspenze tak, aby mohl být přijat testovacím kmenem.
6041 Ames-384 ISO Basic Kit (Obsahuje 1 bakterii, činidla, kontroly a plasty)
6041-2BS Ames-384 ISO Bacterial Strain Kit (Obsahuje 2 bakteriální činidla, kontrol a plastů)
Sada Ames ISO Basic Kit je fluktuační verzí známého „Amesova testu“, který používá 48jamkový formát expozice vzorku na 384jamkové mikrodestičce, aby se snížil počet použitých činidel a plastů. Postup Ames ISO byl vyvinut pro testování mutagenních materiálů v různých zdrojích, jako jsou vzorky vzduchu a vody z životního prostředí, potraviny, výrobky osobní péče a průmyslové odpadní vody, pomocí fluktuačního testu, který je variantou tradičního „Amesova testu“.
Metoda Ames ISO poskytuje výzkumným pracovníkům spolehlivou testovací metodu, která se snadno nastavuje a provádí, je vhodná pro vzorky ve vodném roztoku nebo suspenzi a poskytuje snadno zjistitelný kolorimetrický koncový bod po 2 až 3 dnech inkubace při 37 °C.
5041 Amesova modifikovaná základní souprava ISO (obsahuje 1 bakterii, činidla, kontroly a plasty)
5041-2BS Amesova modifikovaná souprava ISO pro bakteriální kmeny (obsahuje 2 bakteriální činidla, kontroly a plasty)
Tato Amesova testovací metoda je modifikací Amesova testu fluktuace ISO. Bakteriální kmeny jsou předem vystaveny různým koncentracím mutagenních sloučenin s růstovým médiem v suspenzi po dobu 100 minut. Každé ředění se provádí ve třech opakováních.
Vzorky se poté přenesou, smíchají s reverzním roztokem a nanesou na 96jamkovou destičku při použití 48jamkového formátu hodnocení. Vzorky se inkubují 2-3 dny a počet reverzních kolonií (jednotlivé jamky) se spočítá kolorimetrickou analýzou.
Který Amesův test je nejlepší pro můj výzkum
Muta-ChromoPlate Amesův test
- Ideální pro přímé hodnocení vzorků životního prostředí
- Výukové použití pro projekty ve třídě (snadné předvedení)
- 96jamkový formát na 96jamkových destičkách. Více koncových bodů/vzorek může zvýšit významnost
- Bakteriální expozice probíhá po celou dobu testu
- Velmi uživatelsky přívětivé s minimem kroků nutných k získání výsledků
- Vynikající pro testování těkavých materiálů
- Není nutné provádět žádné prekoncentrační kroky, používají se velké objemy vzorků
- Vyšší citlivost výsledků ve srovnání s destičkovými inkorporačními testy
ISO a modifikované ISO Amesovy testy
- Ideální pro farmaceutické objevy a objevy nových molekul
- 48jamkový formát v 96 nebo 384jamkových destičkách snižuje počet destiček potřebných pro vypracování výsledků
- METODA VYSOKÉHO VÝKONU! Rychle lze testovat mnoho vzorků nebo úrovní ředění
- Potřebné menší velikosti vzorků
- Koncentrace bakterií se kontroluje podle optické hustoty (zajišťuje logaritmickou fázi růstu)
- Méně potřebných plastů a činidel, méně likvidace
- Kvantifikace je jednoduchá a vyhodnocení testu je rychlé a snadné
- Test je citlivější než test s inkorporací na destičku
- Využívá se pre-expoziční období pro zvýšení bakteriálního příjmu
- Konzistentnější expoziční koncentrace během auxotrofních růstových fází
Soupravy pro Amesovy testy
EBPI nabízí širokou škálu metod Amesových testů pro výzkum a vývoj, odběru vzorků z životního prostředí a pro projekty objevování léčiv.
|
Muta-ChromoPlate Kit |
Ames ISO Test 384 Well Format |
Modifikovaný Ames ISO Test |
.